[發明專利]血液外泌體分子標志物及其在制備肝癌診斷產品中的應用

有效

• 申請號: 201910357028.3
• 申請日: 2019-04-29
• 公開（公告）號: CN110129440B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 劉艷寧;鄭敏;樓國華
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 朱瑩瑩

血液外泌體分子標志物及其在制備肝癌診斷產品中的應用，本發明屬于生物醫學領域，具體涉及與肝癌診斷相關的血液外泌體(miR?519和/或miR?521)分子標志物及其在制備肝癌診斷產品中的應用。miR?519a:CCUCUAGAGGGAAGCGCUUUCU miR?521:AACGCACUUCCCUUUAGAGUGU。血液Exo?miR?519a和/或Exo?miR?521是新型生物標志物，不僅穩定、微創、易于檢測，且定量精確，將大大提高疾病診斷的敏感性和特異性，該生物標志物的開發有助于肝癌的診斷及轉移風險預警，并為其他腫瘤類似生物標志物的研制提供借鑒。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及與肝癌診斷相關的血液外泌體(miR-519和/或miR-521)分子標志物及其在制備肝癌診斷產品中的應用。

背景技術

肝癌是人類常見的惡性腫瘤之一，其死亡率一直高居不下，在所有腫瘤致死原因中位居第三。而主要原因是：第一，基數龐大，全球范圍內每年新增50萬～100萬病例，約有70萬人死于肝癌，其5年死亡率更是超過90％。而全球肝癌病例中有半數以上在中國，因此肝癌在我國具有高發性及高危性。肝癌病人治療后的復發率高，據統計術后5年復發率高達60-70％。而其中侵襲性(浸潤-轉移)作為惡性腫瘤的主要特點之一，是導致肝癌復發轉移甚至患者死亡的重要原因。

若能在腫瘤未轉移或僅微量轉移時就具有有效的臨床預警指標，則可為高轉移風險患者的早期干預提供依據，進而改善其預后。我們在前期研究中證實PNC(perinucleolarcompartment)作為一種特殊的細胞核結構與腫瘤細胞的轉移特性密切相關，因此可作為腫瘤轉移預測和預后判斷的有效指標。但是PNC作為一個細胞核內結構，其檢測需依賴于組織活檢。若能以外周血特定指標體現PNC比例，則可為肝癌患者轉移風險的預警和預后評估提供有效且便捷的無創診斷標志物。

近來，外泌體(exosome)在腫瘤臨床診斷中的作用備受關注。Exosome是由多種活細胞分泌的囊泡小體，其中含有蛋白質和RNA等多種組分。這種機體內普遍存在的納米級被膜結構能夠參與細胞間的物質交換和信息交流，在多種生理和病理過程中發揮重要作用。外泌體在外周血、尿液、唾液、腹水、羊水等體液中具有很高的豐度，因而有望作為循環生物標志物而實現非侵入性的疾病診斷。

我們采用肝癌細胞株建立小鼠肝癌轉移模型，發現轉移灶肝癌細胞的PNC比例遠遠高于原位灶細胞。分離轉移灶和原位灶肝癌組織并行細胞培養，然后對兩種細胞培養上清的外泌體miRNA組分進行芯片分析，發現外泌體miR-519(Exo-miR-519)和外泌體miR-521(Exo-miR-521)在高PNC比例(轉移灶)的肝癌細胞中顯著升高。提示Exo-miR-519和Exo-miR-521有望作為一種PNC相關的新型標志物而用于肝癌轉移預警，并用于相關診斷產品的制備。

發明內容

本發明的目的在于提供了可用于肝癌轉移預警和預后評估的分子標志物。

與肝癌診斷相關的血液外泌體分子標志物：外泌體miR-519a(Exo-miR-519a)和/或外泌體miR-521(Exo-miR-521)，

miR-519a:CCUCUAGAGGGAAGCGCUUUCU

miR-521:AACGCACUUCCCUUUAGAGUGU。

本發明提供了外泌體miR-519a(Exo-miR-519a)和/或外泌體miR-521(Exo-miR-521)標志物用于肝癌診斷相關的應用。

本發明還提供了用于檢測Exo-miR-519a或Exo-miR-521的試劑及其在制備肝癌轉移風險預警和預后評估產品中的應用。

所述試劑包括任何可用于檢測Exo-miR-519a或Exo-miR-521存在與否或表達高低的方法中所使用的試劑。