[發(fā)明專利]一種提高銅綠假單胞菌檢測準確性方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910355893.4 | 申請日： | 2019-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN110106265A | 公開（公告）日： | 2019-08-09 |
| 發(fā)明（設計）人： | 謝小保;文霞;張淑瑤;張志聰 | 申請（專利權）人： | 廣東省微生物研究所(廣東省微生物分析檢測中心) |
| 主分類號： | C12Q1/689 | 分類號： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/06;C12N15/11;C12R1/385 |
| 代理公司： | 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001 | 代理人： | 劉明星;朱聰聰 |
| 地址： | 510070 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 銅綠假單胞菌 細菌 檢測 檢出 繁殖能力 實時熒光定量PCR 平板培養(yǎng)基 傳統(tǒng)平板 細菌DNA 后提取 總DNA 疊氮 擴增 溴化 配制 受損 | ||
1.一種提高銅綠假單胞菌檢測準確性的方法，其特征在于，包括以下步驟：
配制樣品備檢溶液、向樣品備檢溶液中加入疊氮溴化丙錠進行反應，反應完畢后提取細菌總DNA，再用實時熒光定量PCR檢測銅綠假單胞菌。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的用實時熒光定量PCR檢測銅綠假單胞菌是針對銅綠假單胞菌oprL基因進行實時熒光PCR檢測。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的向樣品備檢溶液中加入疊氮溴化丙錠進行反應為加入疊氮溴化丙錠的終濃度為5.0～15.0mg/L，混勻后25℃避光反應15min，取出置于冰上，500～750W的鹵素燈照射15min，光照距離為20～30cm；光照反應結束后，收集菌體。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的樣品備檢溶液是按每取10g化妝品樣品加入10g滅菌吐溫-80和80mL滅菌生理鹽水，震蕩混勻，制成1:10的樣品備檢溶液。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的針對銅綠假單胞菌oprL基因進行實時熒光PCR檢測，其在實時熒光PCR檢測中的引物對為：
oprL-F：5’-AGCAGCCACTCCAAAGAAACC-3’；
oprL-R：5’-CCAGAGCTTCGTCAGCCTTG-3’。
6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的實時熒光PCR檢測的反應體系包括：premix Ex Taq 10μL，10μmol/L的上、下游引物各0.3μL，50×Dye0.4μL，DNA模板1μL，ddH2O8μL。
7.根據權利要求2或6所述的方法，其特征在于，所述的實時熒光PCR檢測的反應程序為：94℃30s，94℃5s，60℃30s，40個循環(huán)，于60℃進行熒光信號檢測。
8.一種檢測銅綠假單胞菌的檢測引物對，其特征在于，包括：
oprL-F：5’-AGCAGCCACTCCAAAGAAACC-3’；
oprL-R：5’-CCAGAGCTTCGTCAGCCTTG-3’。
9.一種檢測檢測銅綠假單胞菌的檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求8所述的檢測銅綠假單胞菌的檢測引物對。
10.權利要求1-8所述的方法在化妝品中銅綠假單胞菌檢驗中的應用。
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