[發(fā)明專利]檢測(cè)生物膜蛋白質(zhì)間相互作用的方法及所用成套試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910348670.5
• 申請(qǐng)日: 2019-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN111856024B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李丕龍;李茹;王靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 清華大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;C12N15/70;C12N1/21;C12N15/85
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.檢測(cè)蛋白質(zhì)間相互作用的方法，待測(cè)蛋白質(zhì)名稱為X和X_L，所述X為生物膜蛋白質(zhì)，所述方法包括U1）和U2）：

U1）連接所述X與名稱為Y的蛋白質(zhì)，將得到的重組蛋白記為X-Y；連接名稱分別為Y_L與R的蛋白質(zhì)，將得到的重組蛋白記為Y_L-R；所述Y與所述Y_L間具有相互作用，所述R能驅(qū)動(dòng)相分離產(chǎn)生相變液滴；連接所述X_L與名稱為J的報(bào)告基團(tuán)，將得到的重組分子記為X_L-J；

所述X_L為非生物膜蛋白質(zhì)，U2）包括：向生物細(xì)胞中導(dǎo)入所述X-Y的編碼基因，使所述X-Y的編碼基因得到表達(dá)，得到重組細(xì)胞，所述X-Y定位于所述重組細(xì)胞的生物膜上；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入所述Y_L-R和所述X_L-J，檢測(cè)所述J的信號(hào)是否在所述R形成的相變液滴中聚集，確定所述X和所述X_L間是否具有相互作用：如所述J的信號(hào)在所述相變液滴中聚集，所述X和所述X_L間具有或候選具有相互作用；如所述J的信號(hào)在所述相變液滴中沒有聚集，所述X和所述X_L間不具有或候選不具有相互作用；

所述X_L為生物膜蛋白質(zhì)，U2）包括：向生物細(xì)胞中導(dǎo)入所述X-Y的編碼基因和所述X_L-J的編碼基因，使所述X-Y的編碼基因和所述X_L-J的編碼基因得到表達(dá)，得到重組細(xì)胞，所述X-Y和所述X_L-J定位于所述重組細(xì)胞的生物膜上；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入所述Y_L-R，檢測(cè)所述J的信號(hào)是否在所述R形成的相變液滴中聚集，確定所述X和所述X_L間是否具有相互作用：如所述J的信號(hào)在所述相變液滴中聚集，所述X和所述X_L間具有或候選具有相互作用；如所述J的信號(hào)在所述相變液滴中沒有聚集，所述X和所述X_L間不具有或候選不具有相互作用。

2.鑒定蛋白質(zhì)間互作調(diào)控因子的方法，待測(cè)蛋白質(zhì)名稱為X和X_L，所述X為生物膜蛋白質(zhì)，所述X和所述X_L間具有相互作用，所述方法包括V1）和V2）：

V1）連接所述X與名稱為Y的蛋白質(zhì)，將得到的重組蛋白記為X-Y；連接名稱分別為Y_L與R的蛋白質(zhì)，將得到的重組蛋白記為Y_L-R；所述Y與所述Y_L間具有相互作用，所述R能驅(qū)動(dòng)相分離產(chǎn)生相變液滴；連接所述X_L與名稱為J的報(bào)告基團(tuán)，將得到的重組分子記為X_L-J；

所述X_L為非生物膜蛋白質(zhì)，V2）包括：向生物細(xì)胞中導(dǎo)入所述X-Y的編碼基因，使所述X-Y的編碼基因得到表達(dá)，得到重組細(xì)胞，所述X-Y定位于所述重組細(xì)胞的生物膜上；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入所述Y_L-R和所述X_L-J，得到對(duì)照體系；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入待測(cè)調(diào)控因子、所述Y_L-R和所述X_L-J，得到待測(cè)體系；然后檢測(cè)所述待測(cè)體系和所述對(duì)照體系中所述J的信號(hào)在所述R形成的相變液滴中的強(qiáng)度，確定所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用是否具有調(diào)控作用：如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中高于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有促進(jìn)作用；如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中等于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用不具有或候選不具有調(diào)控作用；如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中低于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有抑制作用；

所述X_L為生物膜蛋白質(zhì)，V2）包括：向生物細(xì)胞中導(dǎo)入所述X-Y的編碼基因和所述X_L-J的編碼基因，使所述X-Y的編碼基因和所述X_L-J的編碼基因得到表達(dá)，得到重組細(xì)胞，所述X-Y和所述X_L-J定位于所述重組細(xì)胞的生物膜上；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入所述Y_L-R，得到對(duì)照體系；向所述重組細(xì)胞的培養(yǎng)體系中加入待測(cè)調(diào)控因子和所述Y_L-R，得到待測(cè)體系；然后檢測(cè)所述待測(cè)體系和所述對(duì)照體系中所述J的信號(hào)在所述R形成的相變液滴中的強(qiáng)度，確定所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用是否具有調(diào)控作用：如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中高于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有促進(jìn)作用；如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中等于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用不具有或候選不具有調(diào)控作用；如所述J的信號(hào)強(qiáng)度在所述待測(cè)體系的相變液滴中低于所述對(duì)照體系，所述待測(cè)調(diào)控因子對(duì)所述X和所述X_L間的相互作用具有或候選具有抑制作用。