[發(fā)明專利]一種抗逆性三疣梭子蟹的篩選方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910348654.6
• 申請(qǐng)日: 2019-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN110029143A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李桂仙;張春丹;母昌考;周君
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06;C12Q1/04;C12Q1/02
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種篩選抗逆性三疣梭子蟹的標(biāo)準(zhǔn)，其特征在于，所述的抗逆性的三疣梭子蟹的標(biāo)準(zhǔn)包含有如下的一個(gè)或幾個(gè)指標(biāo)：

血細(xì)胞中顆粒細(xì)胞與透明細(xì)胞的含量分別為38.47±1.78％和57.44±1.28％，

血細(xì)胞中透明細(xì)胞的活性氧含量不低于22.7％；

血細(xì)胞中顆粒細(xì)胞的活性氧不低于40.19％；

血細(xì)胞中透明細(xì)胞的吞噬率不低于4.67％；

血細(xì)胞中顆粒細(xì)胞的吞噬率不低于15.29％。

2.權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)在篩選具有抗逆性的三疣梭子蟹中的應(yīng)用。

3.一種篩選具有抗逆性的三疣梭子蟹的方法，其特征在于，所述的方法是使用權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷所篩選的菌株是否具有抗逆性。

4.一種篩選抗逆性良好的三疣梭子蟹的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟：

1)血淋巴的收集：

從待檢測(cè)的三疣梭子蟹的游泳足基部收集血淋巴，將收集的血淋巴與抗凝劑混合后，在1000r/min，4℃下離心10min后離心棄去上清，收集的細(xì)胞使用4％的多聚甲醛進(jìn)行固定，并用PBS溶液將沉淀進(jìn)行洗滌后，用PBS重懸細(xì)胞；

2)將步驟1)制備的細(xì)胞使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和亞群分析、血細(xì)胞的吞噬能力檢測(cè)、活性氧的檢測(cè)；

其中血細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和亞群分析的條件如下：所獲得的細(xì)胞懸液經(jīng)細(xì)胞計(jì)數(shù)后進(jìn)行流式上樣；橫坐標(biāo)為FSG，縱坐標(biāo)為SSG，收集10000個(gè)細(xì)胞的數(shù)據(jù)；

血細(xì)胞的吞噬能力檢測(cè)：在收集的血淋巴加入適量的2μm熒光微球，室溫下避光震蕩孵育30分鐘；孵育完成后，用PBS洗滌除去多余未結(jié)合的微球；在流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm處接收熒光信號(hào)，收集細(xì)胞量為10000個(gè)；

活性氧的檢測(cè)：使用非熒光探針2'，7'-二氯熒光素二乙酸酯與血細(xì)胞黑暗中在環(huán)境溫度下孵育結(jié)合20分鐘后取出，流式細(xì)胞儀激發(fā)光波長(zhǎng)為488nm處進(jìn)行檢測(cè)，收集10000個(gè)血細(xì)胞；

3)使用檢測(cè)的數(shù)據(jù)與上述確定的指標(biāo)進(jìn)行比較，滿足要求的確定為具有抗逆性的梭子蟹。