[發明專利]具有CL2A接頭的抗體-SN-38免疫綴合物

在審

• 申請號: 201910347750.9
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN110075295A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: S.V.戈文丹;J.B.蓋爾;N.J.霍爾曼;D.M.戈登伯格
• 申請（專利權）人: 免疫醫療公司
• 主分類號: A61K39/395
• 分類號: A61K39/395;A61K47/68;A61P35/00;A61P37/02;A61P31/00;A61K31/4745
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 權陸軍;萬雪松

1.一種產生具有如下結構的化合物CL2A-SN-38的方法，

所述方法包括進行如所顯示的反應方案：

所述方法還包括將SN-38與叔-丁基二甲基氯硅烷(TBDMS-Cl)反應以產生10-O-TBDMS-SN-38(中間體4)，其中在二氯甲烷溶劑中進行所述反應。

2.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括將10-O-TBDMS-SN-38(中間體4)與三光氣和DMAP反應以產生10-O-TBDMS-SN-38-20-O-氯甲酸酯(反應性中間體5)，其中通過將三光氣添加至含有中間體4的二氯甲烷反應混合物中進行所述反應，并且分批添加所述三光氣以在大規模生產中減少放熱反應并維持高反應收率。

3.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括用庚烷沉淀Lys(MMT)-PABOH(中間體2)。

4.根據權利要求3所述的方法，所述方法還包括測定所述沉淀的中間體2中的殘留二乙胺，并且如果檢測到二乙胺的存在，通過層析純化所述沉淀。

5.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括通過銅催化的環化加成反應將疊氮基-PEG-Lys(MMT)-PABO-CO-20-O-SN-38(中間體7)與MCC-炔(中間體8)反應以產生MCC-PEG-Lys(MMT)-PABO-CO-20-O-SN-38(中間體9)，其中進行所述反應14小時以提高產物收率。

6.根據權利要求5所述的方法，其中首先通過硅膠層析純化中間體9，隨后用EDTA提取以除去銅。

7.根據權利要求1所述的方法，所述方法還包括將CL2A-SN38的馬來酰亞胺部分與蛋白質或肽反應以產生綴合有SN38的蛋白質或肽。

8.根據權利要求7所述的方法，其中所述馬來酰亞胺部分與蛋白質或肽上的還原的巰基反應。

9.根據權利要求7所述的方法，其中所述蛋白質或肽為抗體或抗原結合抗體片段并且所述綴合有SN-38的抗體或抗體片段為免疫綴合物。

10.根據權利要求9所述的方法，所述方法還包括通過正切流動過濾(TFF)純化所述免疫綴合物。

11.根據權利要求9所述的方法，其中使用25至30個透析過濾體積的緩沖液，利用50,000道爾頓分子量截斷值的膜進行所述TFF。

12.根據權利要求11所述的方法，所述方法還包括在pH為6.0至7.0的Good氏生物緩沖液中配制所述免疫綴合物以及冷凍干燥所述免疫綴合物以進行貯存。

13.根據權利要求12所述的方法，其中所述Good氏生物緩沖液選自由以下組成的組：2-(N-嗎啉代)乙磺酸(MES)、3-(N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)、4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙磺酸(HEPES)和1,4-哌嗪二乙磺酸(PIPES)，pH在6-7的范圍內，并且緩沖液濃度為10-100mM。

14.根據權利要求13所述的方法，其中所述緩沖液的pH在6.5至7的范圍內。

15.根據權利要求13所述的方法，其中所述緩沖液濃度為25mM。

16.根據權利要求13所述的方法，其中所述緩沖液為25mM MES緩沖液，pH6.5。

17.根據權利要求9所述的方法，其中所述抗體為雙特異性抗體或單克隆抗體。