[發明專利]橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201910347671.8
• 申請日: 2019-04-28
• 公開（公告）號: CN110607395A
• 公開（公告）日: 2019-12-24
• 發明（設計）人: 周科隆;姜雙悌
• 申請（專利權）人: 周科隆;浙江易柏生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 44248 深圳市科吉華烽知識產權事務所(普通合伙)
• 代理人: 謝肖雄

1.橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒，其特征在于設計橫跨內含子的寡核苷酸引物或探針來實施特異性mRNA的檢測。而這些橫跨內含子的引物及探針序列具備HPV mRNA的專一檢測功能，為本發明要求保護的內容。

2.根據權利要求1所述的橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒，采用的引物或探針，分別針對18種中高危HPV E6/E7 mRNA及(或)E1/E2 mRNA。其引物對及探針分別如附表所示。

3.根據權利要求1所述的橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒，其特征還在于使用磁珠法核酸提取純化試劑，選用與RNA親和力優于DNA的硅基磁珠，并可在提取純化中可選加DNA酶消化的步驟。雖然與RNA親和力高的磁珠及DNA酶的使用均非必須，然而，如果基因組DNA顯著超過其m RNA濃度，盡管對檢測特異性無影響，卻對檢測靈敏度有負面作用。因此在核酸提取階段，選用RNA親和力高的硅基磁珠及DNA酶是本發明得以最佳體現的輔助手段。

4.根據權利要求1所述的橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒，其特征還在于使用一步法多重RT-PCR試劑，其配方為：

50m M Tricine(p H8.3)、75m M KOAc、2.5m M Mn(OAc)2、0.1m M EDTA、10U MMLV(RNase H minus)、5U熱啟動耐熱聚合酶、0.2U不耐熱UNG、4U RN asin、0.2m Md NTPs、0.1％BSA、0.02％NaN3,0.1M betaine,0.2μM引物、0.05μM熒光探針。

5.根據權利要求1所述的橫跨內含子的高危型人乳頭瘤病毒mRNA的檢測方法及試劑盒，其特征還在于使用培養上皮細胞系如HcerEpiC細胞為陰性對照，而含有設計序列擴增區的RNA假病毒顆粒為陽性對照。二者均為外購或委托技術服務公司如廈門致善生物定制。