[發明專利]一種靶向CD38的單域抗體及其應用

在審

• 申請號: 201910345695.X
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110229230A
• 公開（公告）日: 2019-09-13
• 發明（設計）人: 郝瑞棟;劉根桃;李彥濤;張大挺;易橋勇;紅麗;吳國祥
• 申請（專利權）人: 上海科棋藥業科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C07K19/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 車超平

本發明涉及本發明涉及一種靶向CD38的單域抗體，其包含CDR1、CDR2、CDR3以及框架區序列；其中，所述CDR1序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.4所示；所述CDR2序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.5所示；所述CDR3序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.6所示。本發明還涉及上述靶向CD38的單域抗體的相關應用。本發明所述的靶向CD38的單域抗體C25和C39與抗原具有優異的親和能力，且僅能與CD38結合，與其它抗原(BCMA，CD138等)均不能結合，其對CD38具有良好的特異性，其單域抗體C25和C39能夠有效結合靶細胞，對于治療多發性骨髓瘤的藥物提供了理論基礎。

技術領域

本發明涉及細胞免疫治療技術領域，尤其涉及一種靶向CD38的單域抗體及其應用。

背景技術

多發性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是一種無法治愈的惡性腫瘤，其特點是患者骨髓中漿細胞惡性增生。當前主要使用蛋白酶體抑制劑、免疫調節劑等來緩解多發性骨髓瘤的癥狀，但是均不能清除腫瘤。當前一些研究通過靶向CD138、CD38、CS-1、BCMA的療法來治療MM。

CD38分子在MM細胞表面一致性的高表達，而在其他淋巴細胞或者髓系細胞上低表達，同時也在部分非血液細胞上表達。CD38是一種跨膜糖蛋白，且具有胞外酶的活性。CD38還在細胞粘附中起到作用。因此，通過靶向CD38來治療MM引起人們的注意，以開發單抗、抗體偶聯藥物、雙特異性抗體、CAR-T等療法；有研究驗證了通過靶向CD38分子可以有效殺傷骨髓瘤細胞；靶向CD38的抗體Daratumumab已被FDA批準用于多發骨髓瘤的治療。但是由于其導致白細胞減少等比較嚴重的不良反應限制了其應用。

重鏈抗體主要存在于駱駝或者羊駝等動物體內，其抗體結構簡單，僅包含重鏈可變區，不包含輕鏈。進一步的，其重鏈可變區被稱為單域抗體或者是納米抗體。相較于普通的抗體結構，單域抗體具有分子小，結構更簡單，穩定性高，易表達等特點。并且其與人源抗體VH3的序列高度同源，其同源性遠超過鼠源單克隆抗體。基于以上優點，近年來對于納米抗體的研究以及在疾病診斷和治療中的應用取得長足的發展。尤其是2019年2月FDA批準了用于治療成人獲得性血栓性血小板減少性紫癜(aTTP)的單域抗體藥物Caplacizumab上市，是全球首個上市的單域抗體藥物。因此，開發新的靶向CD38的單域抗體對于多發性骨髓瘤的治療具有重要意義。

發明內容

為了克服現有技術的缺陷，本發明提供一種能夠特異性靶向CD38的單域抗體。本發明使用純化的CD38抗原免疫羊駝，得到CD38的多克隆抗體，并篩選出特異性VHH片段，構建羊駝噬菌體展示文庫；采用靶分子CD38對噬菌體文庫進行陶選，并對陶選后的文庫進行擴增及噬菌粒救援，對篩選出的CD38單域抗體進行序列比對和進化樹分析，從而獲得能夠特異性靶向CD38的單域抗體。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一個目的是提供一種靶向CD38的單域抗體，所述單域抗體序列包含CDR1、CDR2、CDR3以及框架區序列；其中，所述CDR1序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.4所示；所述CDR2序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.5所示；所述CDR3序列如SEQ ID NO.3或SEQ IDNO.6所示。

進一步地，所述單域抗體為C25抗體或C39抗體，所述C25抗體的序列如SEQ IDNO.7所示，所述C39抗體的序列如SEQ ID NO.8所示。

本發明的第二個目的是提供一種用于編碼上述靶向CD38的單域抗體的核酸。

進一步地，編碼C25抗體的核酸序列如SEQ ID NO.9所示，編碼C39抗體的序列如SEQ ID NO.10所示。

本發明的第三個目的是提供一種包含上述核酸的載體。