[發(fā)明專利]一種由脫細(xì)胞基質(zhì)制備的肌腱防粘連膜及其制備方法

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• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN110038168A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 敖強;陶美含
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號: A61L31/00
• 分類號: A61L31/00;A61L31/14
• 代理公司: 沈陽亞泰專利商標(biāo)代理有限公司 21107
• 代理人: 史力伏

本發(fā)明涉及生物材料領(lǐng)域，尤其涉及一種脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜及其制備方法。本發(fā)明公開的方法取自哺乳動物的肌腱，通過原料處理、脫細(xì)胞、基質(zhì)溶解、低溫干燥成膜、中和水洗等過程，制備獲得一種脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜。本發(fā)明提供的脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜消除了異種及異體組織的免疫原性，保留了肌腱細(xì)胞外基質(zhì)的活性成分，直接包裹肌腱的損傷處，為肌腱修復(fù)提供良好的微環(huán)境，防止肌腱與周圍組織粘連，促進肌腱修復(fù)。另外，本發(fā)明制備肌腱防粘連膜方法的成本低廉。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，涉及組織基質(zhì)材料制備，尤其涉及一種脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜及其制備方法。

背景技術(shù)

肌腱粘連是肌腱損傷后的常見并發(fā)癥，是肌腱損傷修復(fù)過程中周圍組織的增生和侵入，嚴(yán)重影響患者的功能恢復(fù)。而肌腱修復(fù)術(shù)后的長期制動，使肌腱往往產(chǎn)生粘連。伴隨著對肌腱愈合機制及組織工程學(xué)研究的開展與深入，尋找和研制防治肌腱粘連的有效方法，已成為該領(lǐng)域的一個熱點。

可吸收醫(yī)用膜通過物理隔離作用可將手術(shù)創(chuàng)面和周圍組織分開，防止成纖維細(xì)胞入侵，從而有效保護創(chuàng)面，預(yù)防肌腱粘連。目前國內(nèi)外研究大多利用膠質(zhì)膜、透明質(zhì)酸鈉膜、絲素蛋白膜、幾丁糖膜和聚乳酸膜等防治肌腱術(shù)后粘連。然而這些傳統(tǒng)的材料仍區(qū)別于天然的組織結(jié)構(gòu)，存在種種不足，如生物相容性差，因此國內(nèi)外學(xué)者仍在尋找更有效的生物材料。理想的肌腱防粘連材料應(yīng)盡可能模擬人體肌腱所處的生理環(huán)境，防止肌腱粘連，并且能促進損傷肌腱的再生修復(fù)。

細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）是由動物細(xì)胞合成并分泌到胞外、分布在細(xì)胞表面或細(xì)胞之間的大分子，主要成分是結(jié)構(gòu)蛋白、多糖和粘連蛋白等，還有一些生長因子和脂質(zhì)等。這些物質(zhì)構(gòu)成了復(fù)雜的網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，不僅為細(xì)胞提供了一個支持結(jié)構(gòu)和附著位點，而且對細(xì)胞的黏附、遷移、增殖、分化以及基因表達的調(diào)控起重要作用。

ECM材料是通過理化方法去除生物體原組織中的實質(zhì)細(xì)胞制備而得，它保留了除細(xì)胞成分以外的幾乎所有生物活性成分和完整的三維結(jié)構(gòu)，接近天然的組織結(jié)構(gòu)。又由于細(xì)胞外基質(zhì)是結(jié)構(gòu)蛋白和功能蛋白的復(fù)合物，該組分常常在不同物種間保守，并能被異種受體耐受，致敏性低，因此將脫細(xì)胞基質(zhì)用于組織修復(fù)已成為目前國際再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究熱點。目前，通過脫細(xì)胞技術(shù)獲得的ECM材料已廣泛用于人體組織重建，如心臟瓣膜、皮膚和硬腦膜等。但目前未見由脫細(xì)胞基質(zhì)制備的肌腱防粘連膜的報道。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜及其制備方法，本發(fā)明通過將細(xì)胞外基質(zhì)制備成膜，直接包裹肌腱損傷處，為肌腱修復(fù)提供良好的微環(huán)境，防止肌腱與周圍組織粘連，促進肌腱修復(fù)。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。

一種由脫細(xì)胞基質(zhì)制備的肌腱防粘連膜的制備方法，具體步驟如下。

（1）取新鮮動物肌腱，去除附屬脂肪等，機械粉碎成小塊。

（2）用去離子水振蕩漂洗經(jīng)粉碎的動物肌腱3~5次。

（3）-20℃~80℃冷凍5~30分鐘，再20~37℃水浴20~40分鐘。重復(fù)凍融過程5~10個循環(huán)。

（4）用表面活性劑振蕩處理1~6h，去離子水反復(fù)漂洗干凈。

（5）將得到的細(xì)胞外基質(zhì)冷凍干燥。

（6）將凍干的細(xì)胞外基質(zhì)用高速勻漿機粉碎溶于0.1~1mol/L的乙酸溶液中，倒入平底模具中低溫干燥成膜。

（7）將得到的膜用堿溶液（0.05~0.3mol/L的NaOH或KOH溶液）中和，然后水洗至pH中性，晾干，即可得到脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜。

進一步地，所述的動物組織選自哺乳動物的肌腱。

進一步地，所述的脫細(xì)胞基質(zhì)肌腱防粘連膜的厚度為 0.01~0.5mm。