[發明專利]大豆轉化過程中非種系事件的早期檢測和去除

在審

• 申請號: 201910344093.2
• 申請日: 2014-03-14
• 公開（公告）號: CN110172471A
• 公開（公告）日: 2019-08-27
• 發明（設計）人: J·P·塞繆爾;S·R·契納雷迪;A·鮑林;J·惠特克;T·明尼克斯;D·帕雷迪;K·Y·姚;K·A·史密斯
• 申請（專利權）人: 美國陶氏益農公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H6/54;G01N33/68
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種鑒定大豆種系轉化子的方法，包括下述步驟：

(a)用轉基因轉化大豆植物組織；

(b)從經轉化的包含轉基因的大豆植物組織再生芽；

(c)從該包含轉基因的經轉化的大豆植物組織分離再生芽，其中所述分離包括對所述芽進行少于約0.5mm長的橫向水平切割；

(d)將分離的再生芽與膜接觸，其中植物材料從該分離的再生芽被轉移到并固定于該膜，該植物材料包含所述經轉化的包含轉基因的大豆植物組織；

(e)測定該轉移的植物材料以確定所述轉基因在該轉移的植物材料中的位置，其中所述測定包括使用特異性結合從所述轉基因表達的蛋白質的抗體；

(f)確定所述分離的再生芽內的轉基因位置，其中該轉基因位置選自下組：核心(L2/L3)組織層，以及殼套(L1)組織層；和

(g)將顯示L2/L3組織層轉基因位置的分離的再生芽鑒定為大豆種系轉化子。

2.一種從權利要求1的大豆種系轉化子再生成熟的轉基因大豆植物的方法，包括：

(a)選擇包含所述大豆種系轉化子的分離的再生芽；和

(b)將該包含所述大豆種系轉化子的分離的再生芽培養成為成熟的轉基因大豆植物。

3.權利要求1的方法，其中所述轉化采用選自下組的轉化方法：土壤桿菌轉化、生物射彈、磷酸鈣轉化、聚凝胺轉化、原生質體融合轉化、電穿孔轉化、超聲轉化、脂質體轉化、顯微注射轉化、裸DNA轉化、質粒載體轉化、病毒載體轉化、碳化硅介導轉化、氣溶膠聚束轉化、或PEG轉化。

4.權利要求1的方法，其中所述大豆植物組織選自下組：分生性大豆植物組織、皮性大豆植物組織、基本大豆植物組織、和維管大豆植物組織。

5.權利要求4的方法，其中所述分生性大豆植物組織包括頂端分生組織、初生分生組織、或側生分生組織。

6.權利要求4的方法，其中所述皮性大豆植物組織包括表皮。

7.權利要求4的方法，其中所述皮性大豆植物組織包括周皮。

8.權利要求4的方法，其中所述維管大豆植物組織選自木質部或韌皮部。

9.權利要求1的方法，其中所述轉基因包含在至少一個基因表達盒中。

10.權利要求9的方法，其中所述基因表達盒包含選擇標志物基因。

11.權利要求9的方法，其中所述基因表達盒包含性狀基因。

12.權利要求9的方法，其中所述基因表達盒包含RNAi基因。

13.權利要求1的方法，其中所述分離包括對所述芽進行橫向水平切割。

14.權利要求1的方法，其中所述膜包括硝酸纖維素膜、尼龍膜、聚四氟乙烯膜、或聚偏二氟乙烯膜。

15.權利要求1的方法，其中所述測定包括蛋白質檢測測定。

16.權利要求15的方法，其中所述蛋白質檢測測定包括特異性結合從所述轉基因表達的蛋白質的抗體。

17.權利要求1的方法，其中所述確定包括識別固定在所述膜上的轉移的植物材料內的點樣式。

18.權利要求1的方法，其中所述確定包括識別固定在所述膜上的轉移的植物材料內的環樣式。