[發(fā)明專利]川桑色氨酸脫羧酶TDC及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910342319.5
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN111849950A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙愛春;鄭莎;朱映雪;曹博寧;劉長英;張帥;向仲懷
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12P17/10
• 代理公司: 重慶航圖知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.一種川桑色氨酸脫羧酶TDC，其特征在于：所述川桑色氨酸脫羧酶TDC的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述川桑色氨酸脫羧酶TDC，其特征在于：編碼川桑色氨酸脫羧酶TDC的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一種川桑色氨酸脫羧酶基因TDC，其特征在于：所述川桑色氨酸脫羧酶基因TDC的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.權(quán)利要求1所述川桑色氨酸脫羧酶TD在作為L-色氨酸轉(zhuǎn)化為色胺的催化劑中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求3所述川桑色氨酸脫羧酶基因TDC在宿主中重建褪黑素合成途徑中的應(yīng)用，其特征在于：所述TDC為L-色氨酸轉(zhuǎn)化為色胺的關(guān)鍵酶基因。

6.一種制備重組川桑色氨酸脫羧酶TDC的方法，其特征在于：所述將如SEQ ID NO.3所示的川桑色氨酸脫羧酶基因TDC連入Pcold-tf質(zhì)粒KpnⅠ和SalⅠ酶切位點，獲得重組表達載體Pcold-tf-TDC，再將獲得的重組表達載體轉(zhuǎn)化表達菌株B21(DE3)，在28℃、IPTG終濃度為1mM條件下誘導(dǎo)表達，提取，純化，獲得重組川桑色氨酸脫羧酶TDC。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備重組川桑色氨酸脫羧酶TDC的方法，其特征在于：所述提取的方法是收集菌體，在功率為200W條件下超聲破碎，超聲總時間15min，每超聲1s，暫停3s；然后在4℃、15000g條件下離心20min，收集上清。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備重組川桑色氨酸脫羧酶TDC的方法，其特征在于：所述純化是使用鎳柱純化，用含咪唑濃度為100mM的洗脫液進行洗脫。

9.由權(quán)利要求6～8任一項所述的方法制得的重組川桑色氨酸脫羧酶TDC。

10.權(quán)利要求9所述重組川桑色氨酸脫羧酶TDC在作為L-色氨酸轉(zhuǎn)化為色胺的催化劑中的應(yīng)用。