[發明專利]川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3及其應用

在審

• 申請號: 201910342241.7
• 申請日: 2019-04-26
• 公開（公告）號: CN111849935A
• 公開（公告）日: 2020-10-30
• 發明（設計）人: 趙愛春;鄭莎;朱映雪;范偉;劉長英;張帥;向仲懷
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P17/10
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.一種川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3，其特征在于：所述川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根據權利要求1所述川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3，其特征在于：編碼川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.一種川桑咖啡酸氧甲基轉移酶基因COMT3，其特征在于：所述川桑咖啡酸氧甲基轉移酶基因COMT3的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.權利要求1所述川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3在作為5-羥色胺轉化為5-甲氧基-色胺或N-乙酰-5-羥色胺轉化為褪黑素的催化劑中的應用。

5.權利要求3所述川桑咖啡酸氧甲基轉移酶基因COMT3在宿主細胞中重建褪黑素合成途徑中的應用，其特征在于：所述COMT3催化5-羥色胺轉化為5-甲氧基-色胺或N-乙酰-5-羥色胺轉化為褪黑素的關鍵酶基因。

6.一種制備重組咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3的方法，其特征在于：所述將如SEQ IDNO.3所示的川桑咖啡酸氧甲基轉移酶基因COMT3連入Pcold-tf質粒KpnⅠ和EcoRI酶切位點，獲得重組表達載體Pcold-tf-COMT3，再將獲得的重組表達載體轉化表達菌株B21(DE3)，在28℃、IPTG終濃度為1mM條件下誘導表達，提取，純化，獲得重組川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3。

7.根據權利要求6所述制備重組川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3的方法，其特征在于：所述提取的方法是收集菌體，在功率為200W條件下超聲破碎，超聲總時間15min，每超聲1s，暫停3s；然后在4℃、15000g條件下離心20min，收集上清。

8.根據權利要求6所述制備重組川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3的方法，其特征在于：所述純化是使用鎳柱純化，用含咪唑濃度為100mM的洗脫液進行洗脫。

9.由權利要求6～8任一項所述的方法制得的重組川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3。

10.權利要求9所述重組川桑咖啡酸氧甲基轉移酶COMT3在作為5-羥色胺轉化為5-甲氧基-色胺或N-乙酰-5-羥色胺轉化為褪黑素的催化劑中的應用。