[發(fā)明專利]粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910342234.7
• 申請(qǐng)日: 2019-04-26
• 公開（公告）號(hào): CN111849934B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙愛(ài)春;鄭莎;朱映雪;張帥;夏中強(qiáng);劉長(zhǎng)英;向仲懷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/10
• 分類號(hào): C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12P17/10
• 代理公司: 重慶航圖知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

1.粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT，其特征在于：所述粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT為ASMT4、ASMT6和ASMT20，所述ASMT4的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示，所述ASMT6的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述ASMT20的氨基酸序列由如SEQID NO.11所示的核苷酸編碼。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT，其特征在于：所述ASMT4的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述ASMT6的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述ASMT20的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示。

3.粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的基因，其特征在于：所述基因?yàn)锳SMT4基因、ASMT6基因和ASMT20基因，所述ASMT4基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述ASMT6基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述ASMT20基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.11所示。

4.權(quán)利要求1所述粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT在作為N-乙酰-5-羥色胺轉(zhuǎn)化為褪黑素或褪黑素異構(gòu)體的催化劑中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求3所述粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的基因在宿主細(xì)胞中重建褪黑素合成途徑中的應(yīng)用，其特征在于：所述基因?yàn)榇呋疦-乙酰-5-羥色胺轉(zhuǎn)化為褪黑素或褪黑素異構(gòu)體的關(guān)鍵酶基因。

6.一種制備重組粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的方法，其特征在于：所述將如SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.11所示的粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的基因分別連入Pcold-tf質(zhì)粒KpnⅠ和SalⅠ、SpeI E和EcoRI、KpnI和EcoRI酶切位點(diǎn)，分別獲得重組表達(dá)載體Pcold-tf-ASMT4、Pcold-tf-ASMT6和Pcold-tf-ASMT20，再將獲得的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株B21(DE3)，在28℃、IPTG終濃度為1mM條件下誘導(dǎo)表達(dá)，提取，純化，獲得重組粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備重組粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的方法，其特征在于：所述提取的方法是收集菌體，在功率為200W條件下超聲破碎，超聲總時(shí)間15min，每超聲1s，暫停3s；然后在4℃、15000g條件下離心20min，收集上清。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述制備重組粵桑大十N-乙酰-5羥色胺氧甲基轉(zhuǎn)移酶ASMT的方法，其特征在于：所述純化是使用鎳柱純化，用含咪唑濃度為100mM的洗脫液進(jìn)行洗脫。