[發明專利]一種新的測定核糖體失活蛋白的酶活性的方法有效
| 申請號： | 201910341894.3 | 申請日： | 2019-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN110106228B | 公開（公告）日： | 2022-10-25 |
| 發明（設計）人： | 孟堯;孟延發 | 申請（專利權）人： | 成都醫學院 |
| 主分類號： | C12Q1/34 | 分類號： | C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26 |
| 代理公司： | 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222 | 代理人： | 李高峽;張娟 |
| 地址： | 610000 四川省*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 測定 核糖體 蛋白 活性 方法 | ||
1.一種測定核糖體失活蛋白活性的方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)核糖體失活蛋白與三磷酸腺苷和Triton X-100混合，于53~62℃和pH 1~3的條件下反應；所述核糖體失活蛋白為MAP30；
(2)步驟(1)的產物與偶聯酶試劑混合，發生酶促反應和顯色反應，反應溫度為37℃，反應時間為20min，反應pH為6.5~7.0；
(3)測定550nm處的光吸收值；
所述偶聯酶試劑含有催化量的腺苷脫氨酶、過氧化物酶和黃嘌呤氧化酶，以及足夠量轉化(2)中酶促反應產生的所有過氧化氫的4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽；
步驟(1)的反應時間為30min~60min。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中反應溫度為55~58℃。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述偶聯酶試劑中含有：
40mM的N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺鈉鹽、5g/L的4-氨基安替比林、9U/mL的過氧化物酶、6U/mL的腺苷脫氨酶、6U/mL的黃嘌呤氧化酶。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，它還包括：
使用步驟(3)所測得光吸收值來直接表示核糖體失活蛋白的相對活性大小。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，它還包括：
以活性單位表示核糖體失活蛋白的活性；
所述活性單位定義是：在給定的條件下，每分鐘產生1μmol的過氧化氫為1個活性單位；
公式中，CA mmol/L，腺嘌呤濃度；VtmL，反應總體積；Vs1 mL，RIP體積；Vs2 mL，從Vt中取出的反應液體積；t min，底物與酶的反應時間；103 μmol；df，RIP稀釋倍數。
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