[發(fā)明專利]一種克百威農(nóng)藥的納米抗體及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910341232.6
• 申請(qǐng)日: 2019-04-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110407943B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王弘;張瑾如;楊金易;徐振林;孫遠(yuǎn)明;沈玉棟;肖治理
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K16/44
• 分類號(hào): C07K16/44;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/53;C12R1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發(fā)明公開(kāi)了一種克百威農(nóng)藥的納米抗體及其制備方法和應(yīng)用，該納米抗體，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；編碼其的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發(fā)明得到一種針對(duì)克百威農(nóng)藥的納米抗體，該納米抗體能夠檢測(cè)克百威農(nóng)藥，且檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、效果好、穩(wěn)定性好，在高溫和有機(jī)溶劑的條件下還有很好的檢測(cè)效果。該抗體不僅可以廣泛的應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品中克百威農(nóng)藥殘留的檢測(cè)；還可以作為前體，通過(guò)隨機(jī)或定點(diǎn)突變技術(shù)進(jìn)行改造，能夠獲得性質(zhì)(親和性、特異性、穩(wěn)定性等)更好的突變體，用來(lái)發(fā)展進(jìn)一步用于食品、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，有很大的應(yīng)用推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種克百威農(nóng)藥的納米抗體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

氨基甲酸酯類化合物在農(nóng)藥上用作殺蟲(chóng)劑、殺螨劑、除草劑和殺菌劑，已形成農(nóng)藥的一大類別，品種多、藥效好、低毒。氨基甲酸酯類農(nóng)藥是農(nóng)藥急性中毒的主要原因，也是時(shí)下蔬菜中農(nóng)藥殘留的重點(diǎn)檢測(cè)品種。

克百威商品名呋喃丹，是氨基甲酸酯類廣譜內(nèi)吸殺蟲(chóng)殺螨殺線蟲(chóng)劑，可用于多種作物防治土壤內(nèi)及地面上的300多種害蟲(chóng)和線蟲(chóng)。并有縮短作物生長(zhǎng)期、促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育從而有效提高作物產(chǎn)量的作用。廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果和糧食作物等的害蟲(chóng)防治中。但是，克百威對(duì)人和動(dòng)物有很高的毒性，并且不易降解，容易造成環(huán)境污染。我國(guó)已規(guī)定食品中克百威的最大殘留限量，但違規(guī)使用現(xiàn)象仍然較多，因此加強(qiáng)對(duì)克百威農(nóng)藥殘留的檢測(cè)十分必要。

目前，克百威殘留分析一般使用氣相色譜法(簡(jiǎn)稱GC)、高效液相色譜法(簡(jiǎn)稱HPLC)及色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，這些方法靈敏、準(zhǔn)確，可以同時(shí)測(cè)定多種藥物，但樣品前處理復(fù)雜、繁瑣費(fèi)時(shí)，且需要昂貴的儀器設(shè)備和專業(yè)的操作人員，檢測(cè)成本高，難以滿足樣品現(xiàn)場(chǎng)、批量、快速檢測(cè)的需要。因此，開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單快速、適用于農(nóng)藥殘留現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控的分析方法具有重要意義。而基于抗體建立的免疫分析方法，雖然具有快速、靈敏、高通量的優(yōu)勢(shì)，但是在極端條件下抗體往往穩(wěn)定性差，容易失活。

因此目前缺乏一種穩(wěn)定性好的克百威抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種克百威農(nóng)藥的納米抗體及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種特異性識(shí)別克百威的納米抗體。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種編碼特異性識(shí)別克百威納米抗體的基因。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種重組載體。

本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種重組細(xì)胞。

本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供所述納米抗體、所述基因、所述重組載體、或所述重組細(xì)胞中的一種或幾種在檢測(cè)克百威或制備克百威的檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第六個(gè)目的是提供所述納米抗體的制備方法。

本發(fā)明的第七個(gè)目的是提供一種克百威的檢測(cè)方法。

本發(fā)明的第八個(gè)目的是提供一種檢測(cè)克百威的試劑盒。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的：

納米抗體的穩(wěn)定性好、親和力較高，克服了小分子功能抗體的缺點(diǎn)，同時(shí)又具有分子質(zhì)量小、免疫原性弱、組織穿透力強(qiáng)等單克隆抗體、多克隆抗體不具備的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明通過(guò)噬菌體展示技術(shù)，從駝源免疫單域重鏈抗體庫(kù)中篩選出能與靶分子(克百威完全抗原)特異性結(jié)合的納米抗體，建立了一種快速、靈敏且穩(wěn)定的檢測(cè)蔬菜、茶葉中克百威殘留的方法。

因此本發(fā)明要求保護(hù)以下內(nèi)容：

一種特異性識(shí)別克百威的納米抗體，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

編碼特異性識(shí)別克百威納米抗體的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。