[發明專利]二茂鐵基共價有機框架修飾電極的制備方法及其電化學檢測肌鈣蛋白的方法

有效

• 申請號: 201910339712.9
• 申請日: 2019-04-25
• 公開（公告）號: CN110044987B
• 公開（公告）日: 2021-10-26
• 發明（設計）人: 高鳳;汪慶祥;宋娟
• 申請（專利權）人: 閩南師范大學
• 主分類號: G01N27/327
• 分類號: G01N27/327;G01N27/48;G01N33/68
• 代理公司: 廈門知人匠心知識產權代理有限公司 35255
• 代理人: 吳慧敏

1.二茂鐵基共價有機框架修飾電極的制備方法，其特征在于：

步驟一：將1～20mmol/L 2,3,6,7,10,11-六羥基三亞苯水溶液和1～20mmol/L硼酸二茂鐵的水溶液按照體積比1:3混合，15～50℃下恒溫反應8～24h，得到的混合液標記為混合液A；

步驟二：COF修飾電極制備：將預處理過的金電極先滴涂3～20μL濃度為1～20mmol/L對巰基苯硼酸乙醇溶液，室溫下晾干，重復滴涂、晾干3～6次后，用蒸餾水淋洗；再將電極上滴涂3～20μL混合液A，室溫下晾干，重復滴涂、晾干3～6次，蒸餾水淋洗，得到共價有機框架/金電極，記為修飾電極1；

步驟三：然后將修飾電極1滴涂3～20μL濃度為1～20 mmol/L的MCH，室溫下晾干，重復滴涂3～6次，蒸餾水淋洗，得到修飾電極2；

步驟四：滴涂5～20μL濃度為1～1000nmol/L的Tro4單鏈探針于修飾電極2上，所述Tro4單鏈探針的探針序列為: 5’-CGTG CAGT ACGC CAAC CTTT CTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’；并在15～50℃恒溫反應30～90min，然后，在混合磷酸鹽緩沖液中浸泡1～20min，得到二茂鐵基共價有機框架修飾電極。

2.如權利要求1所述的二茂鐵基共價有機框架修飾電極的制備方法，其特征在于：步驟二中所述金電極的預處理工藝為：金電極依次用粒徑為1.0μm、0.3μm和0.05μm的鋁粉拋光，然后將金電極放置于去離子水、乙醇和水體積比為1:1的乙醇溶液、去離子水中各超聲5min，再將金電極浸泡在H₂SO₄:H₂O₂體積比為7:3的溶液中活化20min，活化后將金電極放置在0.5M H₂SO₄溶液中用循環伏安法掃描，掃描區間為-0.2～+1.5V，掃速100mV/s，掃描50圈，最后用大量水沖洗電極至中性，用N₂吹干金電極表面。

3.如權利要求1所述的二茂鐵基共價有機框架修飾電極的制備方法，其特征在于：所述Tro4單鏈探針與目標肌鈣蛋白特異性結合，其序列為: 5’-CGTG CAGT ACGC CAAC CTTTCTCA TGCG CTGC CCCT CTTA-3’。

4.如權利要求1所述的二茂鐵基共價有機框架修飾電極的制備方法，其特征在于：步驟四中修飾電極2滴涂Tro4單鏈探針后，隨后的恒溫反應的反應條件為在12μL對巰基苯硼酸、12μL硼酸二茂鐵-六羥基三亞苯混合液中富集60min。

5.如權利要求1至4任一項制備方法所得二茂鐵基共價有機框架修飾電極的電化學檢測肌鈣蛋白的方法，其特征在于：

步驟一：將所得二茂鐵基共價有機框架修飾電極用超純水淋洗，在某一濃度肌鈣蛋白富集30～90分鐘后，在混合磷酸鹽緩沖液中測得的差分脈沖曲線；

步驟二：將肌鈣蛋白濃度依次遞增，得到多個差分脈沖曲線，將多個差分脈沖曲線的峰電流I_p與對應的肌鈣蛋白的濃度作圖，得出差分脈沖曲線峰電流I_p與肌鈣蛋白濃度的線性關系；

步驟三：檢測測試樣時，測得相同條件下的差分脈沖曲線的峰電流I_p，利用步驟二所得線性關系定量分析測試樣中的肌鈣蛋白含量。