[發明專利]同位素標記仿生糖或糖組、其制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910335230.6
• 申請日: 2019-04-24
• 公開（公告）號: CN110028539B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 顧建新;任士芳;秦文俊
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07H21/00
• 分類號: C07H21/00;C07H1/00;C07B59/00;G01N33/68
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 楊昀

1.一種修飾的同位素標記仿生糖或包含修飾的同位素標記仿生糖的糖組，其中，與其對應的未修飾聚糖相比，所述仿生糖包括位于糖鏈還原端的醇羥基以及同位素標記，且所述仿生糖的分子量增加了3道爾頓，其中所述仿生糖中的同位素標記為位于糖鏈還原端醇羥基上的氘代，所述未修飾聚糖的還原端為半縮醛基；

所述醇羥基以及同位素標記為未修飾聚糖的還原端經還原反應開環產生，

且其中，所述糖鏈為N-糖鏈，且所述未修飾聚糖和所述仿生糖的還原端分別如式(I)和式(I')所示：

式(I)和式(I')中代表與糖鏈其他部分連接的鍵，式(I')中的D代表氘代。

2.一種制備如權利要求1所述的同位素標記仿生糖或糖組的方法，所述方法包括：

(A) 提供待修飾糖鏈或糖組；

(B) 通過針對待修飾糖鏈或糖組的還原反應，使得所述待修飾糖鏈或糖組的還原端半縮醛結構轉變為醇羥基并包含同位素標記。

3.如權利要求2所述的方法，其中，所述還原反應中采用硼氘化鈉。

4.一種分析樣品中糖鏈或糖組的方法，所述方法包括如下步驟：

(i) 提供還原端為半縮醛的樣品糖鏈；

(ii) 提供與樣品糖鏈對應的如權利要求1中所述的仿生糖鏈，所述仿生糖鏈包括位于糖鏈還原端的醇羥基以及同位素標記，且與樣品糖鏈相比，所述仿生糖的分子量增加了3道爾頓；

(iii) 將所述樣品糖鏈和所述仿生糖鏈混合，形成混合物；

(iv) 對所述混合物進行質量分析；

(v) 根據樣品糖鏈與仿生糖鏈的質量分析數據的比較和/或比值，對樣品糖鏈進行定性和/或定量，

其中，所述仿生糖中的同位素標記為位于糖鏈還原端醇羥基上的氘代，

且其中，所述方法不是疾病診斷或治療方法。

5.如權利要求4所述的方法，其中，所述樣品為生產或開發樣品。

6.如權利要求5所述的方法，其中，所述生產或開發樣品選自：帶糖鏈藥物的質檢樣品、抗體藥物開發樣品。

7.如權利要求6所述的方法，其中，所述帶糖鏈藥物為抗體藥物。

8.如權利要求5所述的方法，其中，采用酶法、化學法和/或其組合來釋放糖鏈；

所述純化和/或富集通過離心、沉淀分離、過濾、色譜分離方式進行；

所述比較和/或比值通過計算軟件和/或算法獲得；和/或

樣品中每一個未同位素標記的糖鏈都有一個與之相對應的同位素標記的糖鏈。

9.如權利要求8所述的方法，其中，所述酶法采用了PNGase F、內切糖苷酶H、F2、F3、神經酰胺糖內切酶II；

所述化學法采用了β消除反應。

10.如權利要求4所述的方法，其中，所述方法包括：

在步驟(i)和/或步驟(ii)中，通過從糖復合物中釋放糖鏈來提供還原端為半縮醛的樣品糖鏈或經還原標記獲得仿生糖鏈；和/或

在步驟(ii)中通過還原反應，使得所述樣品糖鏈或糖組的還原端半縮醛結構轉變為醇羥基并包含同位素標記；和/或

步驟(iv)的質量分析采用選自下組的一種或多種方式進行：質譜分析；高效液相色譜；液質聯用；毛細管電泳-質譜聯用；和/或

步驟(v)中的所述比較和/或比值包括：出峰位置比較、峰高比較、峰面積比較和/或比值、及其任何組合；和/或

對內標糖鏈和樣品糖鏈進行處理，以適應后續的質量分析。