[發明專利]一種基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器

在審

• 申請號: 201910334485.0
• 申請日: 2019-04-24
• 公開（公告）號: CN110028586A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 楊鵬;劉瑞瑞
• 申請（專利權）人: 陜西師范大學
• 主分類號: C07K17/14
• 分類號: C07K17/14;C12N11/14;C12N15/10;C07K16/00
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于該微反應器由下述方法制備得到：

(1)將Na₂CO₃和CaCl₂加入水中，并加入生物大分子，攪拌15～60秒，靜置2～10分鐘后，通過去離子水離心清洗，得到負載有生物大分子的CaCO₃顆粒；或者將CaCO₃顆粒分散于生物大分子水溶液中，室溫下培育12～24小時，得到負載有生物大分子的CaCO₃顆粒；

(2)將1～200mmol/L三(2-羧乙基)膦的磷酸鹽緩沖液用NaOH調節至pH值為6.5～7.5，然后將其與1～50mg/mL蛋白質的磷酸鹽緩沖液混合均勻，并加入上述制備好的負載有生物大分子的CaCO₃顆粒，室溫下培育30～60分鐘，離心清洗去除反應雜質，得到蛋白質薄膜包裹的負載有生物大分子的CaCO₃顆粒；

(3)將蛋白質薄膜包裹的負載有生物大分子的CaCO₃顆粒浸沒在0.001～0.1mol/L的EDTA溶液或者pH為1～6的酸性溶液中，刻蝕掉CaCO₃，得到蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器。

2.根據權利要求1所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：步驟(1)中，將Na₂CO₃和CaCl₂加入水中，控制水中Na₂CO₃的濃度為0.1～0.6moml/L、CaCl₂的濃度為0.1～0.6moml/L，Na₂CO₃和CaCl₂的摩爾比為1:1。

3.根據權利要求1所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：步驟(1)中，所述的生物大分子為蛋白質、酶、抗體、脂質、多肽、DNA、RNA中任意一種或多種。

4.根據權利要求3所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：所述生物大分子的加入質量為CaCO₃顆粒質量的0.01％～1％。

5.根據權利要求1所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：步驟(2)中，將8～40mmol/L三(2-羧乙基)膦的磷酸鹽緩沖液用NaOH調節至pH值為7.0，然后將其與2～10mg/mL蛋白質的磷酸鹽緩沖液按體積比為1:1混合均勻，并加入上述制備好的負載有生物大分子的CaCO₃顆粒，室溫下培育30～60分鐘。

6.根據權利要求1或5所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：步驟(2)中，所述的蛋白質為溶菌酶、牛血清白蛋白、胰島素、α-乳白蛋白中任意一種。

7.根據權利要求1所述的基于蛋白質薄膜隔離固定的生物大分子微反應器，其特征在于：步驟(3)中，將蛋白質薄膜包裹的負載有生物大分子的CaCO₃顆粒浸沒在0.01～0.1mol/L的EDTA溶液或者pH為3～4的酸性溶液中，刻蝕掉CaCO₃。