[發明專利]一種長效重組人促卵泡激素及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201910334484.6
• 申請日: 2019-04-24
• 公開（公告）號: CN109942717A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 巴塞姆·法瑞斯
• 申請（專利權）人: 上海延立藥業有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;A61K38/24;A61P15/08
• 代理公司: 上海邦德專利代理事務所(普通合伙) 31312
• 代理人: 余昌昊

1.一種重組hFSH-Fc融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白為二聚化融合蛋白，其中一個單體氨基酸序列從N端到C端依次為hFSHβ亞基、CTP、CTP和hFSHα亞基；另一個單體氨基酸序列從N端到C端依次為CTP、hFSHα亞基、hFSHβ亞基和CTP；

所述hFSHβ亞基的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述CTP的氨基酸序列如SEQ IDNO:2所示；所述hFSHα亞基的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.一種權利要求1所述重組hFSH-Fc融合蛋白的制備方法，其特征在于，包括：利用重疊聚合酶鏈反應構建CTP序列與FSHβ亞基的嵌合基因；將嵌合基因克隆到含有LTR/CMV啟動子的真核表達載體中；將構建的含FSHα亞基和FSHβ亞基的載體聯合轉染到中國倉鼠卵巢細胞中，篩選出穩定表達的細胞株；收集來自穩定表達的細胞株的培養基中的FSH變異體，并純化得到重組hFSH融合蛋白。

3.根據權利要求2所述一種重組hFSH-Fc融合蛋白的制備方法，其特征在于，所述嵌合基因的構建包括如下步驟：S1.構建FSHβ-CTP；S2.構建FSHβ(CTP)2；S3.CTP-α嵌合基因的構建。

4.根據權利要求3所述一種重組hFSH-Fc融合蛋白的制備方法，其特征在于，步驟S1的包括如下步驟：

(1)把FSHβ基因作為引物1和引物2的模板，其中，引物1包含一個限制位點的FSHβ5’端序列，引物2包含CTP的前4個基碼和FSHβ序列的3’端的后4個基碼；

(2)使用hCGβ-CTP基因作為引物3和引物4的模板，其中，引物3包含FSHβ序列3’端的后4個基碼和CTP序列的前四個基碼，引物4包含CTP序列3’端的4個基碼和一個限制位點。

(3)用于反應1號和2號的DNA模板，被用來作為引物1和4的模板，以放大FSHβ-CTP。

5.根據權利要求3所述所述一種重組hFSH-Fc融合蛋白的制備方法，其特征在于，步驟S2的具體步驟如下：

(1)使用FSHβ基因作為引物1和引物2的模板，其中，引物1包含一個限制位點的FSHβ5’端序列，引物2包含CTP的前4個基碼和FSHβCTP序列的3’端的后4個基碼；

(2)使用hCGβ-CTP基因作為引物3和引物4的模板，其中，引物3含有FSHβ-CTP序列3’端的后4個基碼和CTP序列的前4個基碼，引物4含有CTP序列3’端的4個基碼和一個限制位點；

(3)使用于反應1號和2號的DNA模板，作為引物1和4的模板，以放大FSHβ-(CTP)2。

6.根據權利要求3所述所述一種重組hFSH-Fc融合蛋白的制備方法，其特征在于，步驟S3的具體步驟如下：

(1)使用hCGβ基因作為引物hCGβ1和2的模板，其中，引物1包含一個限制位點的CTP的5’端序列，引物2包含α亞單位的前4個基碼和CTP序列3’端的后4個基碼；

(2)使用α基因作為引物3和引物4的模板，其中，引物3含有CTP序列的后4個3’端基碼和α序列的前4個基碼，引物4含有α序列3’端的4個基碼和一個限制位點；

(3)使用于反應1號和2號的DNA模板，作為引物1和4的模板，以放大CTP-α嵌合基因。

7.一種藥物組合物，其特征在于，包含藥學上可接受的載體或賦形劑或稀釋劑，以及有效量的權利要求1所述的重組hFSH-Fc融合蛋白。

8.權利要求1所述的重組hFSH-Fc融合蛋白在制備治療不孕不育癥藥物中的應用。

9.權利要求1的重組hFSH-Fc融合蛋白在制備動物繁殖領域藥物中的應用。