[發明專利]一種靈敏適配體熒光各向異性分析黃曲霉毒素B1的方法有效
| 申請號： | 201910333449.2 | 申請日： | 2019-04-24 |
| 公開（公告）號： | CN110095442B | 公開（公告）日： | 2020-03-03 |
| 發明（設計）人： | 趙強;李亞飄 | 申請（專利權）人： | 中國科學院生態環境研究中心 |
| 主分類號： | C12N15/115 | 分類號： | C12N15/115 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 秦夢楠 |
| 地址： | 100085*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 靈敏 適配體 熒光 各向異性 分析 黃曲霉 毒素 b1 方法 | ||
1.一種檢測黃曲霉毒素B1的方法，包括如下步驟：將熒光染料標記的核酸適配體、鏈霉親和素標記的單鏈DNA分子和待測樣本共同反應，通過測定反應體系的熒光各向異性值實現對待測樣本中黃曲霉毒素B1的檢測；
所述核酸適配體能夠特異性結合黃曲霉毒素B1；
所述單鏈DNA分子能夠與所述核酸適配體的部分序列反向互補形成雙鏈結構；當形成雙鏈結構后，熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結構的同一端，兩者在空間上鄰近；
所述核酸適配體為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
所述單鏈DNA分子為如下（b1）-（b6）中的任一種：
（b1）序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；
（b2）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
（b3）序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；
（b4）序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；
（b5）序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；
（b6）序列表的序列7所示的單鏈DNA分子。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述“熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結構的同一端，兩者在空間上鄰近”是通過如下（a1）或（a2）所示的方式實現的：
（a1）當單鏈DNA分子與核酸適配體的自5’末端起部分序列反向互補時，所述熒光染料標記于核酸適配體的5’ 末端，所述鏈霉親和素標記于單鏈DNA分子的3’ 末端；
（a2）當單鏈DNA分子與核酸適配體的自3’ 末端起部分序列反向互補時，所述熒光染料標記于核酸適配體的3’ 末端，所述鏈霉親和素標記于單鏈DNA分子的5’ 末端。
3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述熒光染料為熒光素FAM。
4.一種DNA分子組合，由熒光染料標記的核酸適配體和鏈霉親和素標記的單鏈DNA分子組成；所述核酸適配體能夠特異性結合黃曲霉毒素B1；所述單鏈DNA分子能夠與所述核酸適配體的部分序列反向互補形成雙鏈結構；當形成雙鏈結構后，熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結構的同一端，兩者在空間上鄰近；
所述核酸適配體為序列表的序列1所示的單鏈DNA分子；
所述單鏈DNA分子為如下（b1）-（b6）中的任一種：
（b1）序列表的序列4所示的單鏈DNA分子；
（b2）序列表的序列2所示的單鏈DNA分子；
（b3）序列表的序列3所示的單鏈DNA分子；
（b4）序列表的序列5所示的單鏈DNA分子；
（b5）序列表的序列6所示的單鏈DNA分子；
（b6）序列表的序列7所示的單鏈DNA分子。
5.如權利要求4所述的DNA分子組合，其特征在于：所述“熒光染料和鏈霉親和素位于雙鏈結構的同一端，兩者在空間上鄰近”是通過如下（a1）或（a2）所示的方式實現的：
（a1）當單鏈DNA分子與核酸適配體的自5’末端起部分序列反向互補時，所述熒光染料標記于核酸適配體的5’ 末端，所述鏈霉親和素標記于單鏈DNA分子的3’ 末端；
（a2）當單鏈DNA分子與核酸適配體的自3’ 末端起部分序列反向互補時，所述熒光染料標記于核酸適配體的3’ 末端，所述鏈霉親和素標記于單鏈DNA分子的5’ 末端。
6.如權利要求4或5所述的DNA分子組合，其特征在于：所述熒光染料為熒光素FAM。
7.權利要求4至6任一所述的DNA分子組合的應用，為如下（c1）或（c2）：
（c1）檢測黃曲霉毒素B1；
（c2）制備用于檢測黃曲霉毒素B1的試劑盒。
8.含有權利要求4至6任一所述的DNA分子組合的試劑盒；所述試劑盒的用途為檢測黃曲霉毒素B1。
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