[發明專利]個體化的粒細胞抗癌活性檢測

在審

• 申請號: 201910332562.9
• 申請日: 2019-04-24
• 公開（公告）號: CN109971819A
• 公開（公告）日: 2019-07-05
• 發明（設計）人: 王申俊;胡向兵
• 申請（專利權）人: 江蘇粒福特生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京中政聯科專利代理事務所(普通合伙) 11489
• 代理人: 何浩

本發明涉及個體化的粒細胞抗癌活性檢測，包括腫瘤標本的取材、腫瘤單細胞懸液的制備、去除紅細胞及雜細胞、純化腫瘤細胞、單細胞軟瓊脂克隆團的獲取和細胞培養、粒細胞制備和粒細胞抗癌活性檢測（CKA）。本發明通過原代培養獲得的腫瘤細胞，作為靶細胞篩選高抗癌活性的粒細胞，對臨床腫瘤的治療具有極好的指導作用，避免憑借臨床經驗盲目用藥，降低抗癌藥物作用的不良反應，為臨床治療提供客觀依據，同時其作為靶細胞篩選高抗癌活性的粒細胞，在制備過程中步驟嚴謹，粒細胞能夠有效作為個體化的粒細胞抗癌活性檢測的檢測項目，保證檢測數據的嚴謹性與準確性,為臨床應用提供數據支持。

技術領域

本發明涉及粒細胞抗癌活性檢測技術領域，具體為個體化的粒細胞抗癌活性檢測。

背景技術

粒細胞是機體固有免疫系統的重要組成部分，在調節機體免疫應答過程中發揮重要作用。近年來研究表明：粒細胞不僅具有抗菌作用，而且具有顯著的抗腫瘤作用。

研究表明：癌癥對不同化療藥物或不同化療藥物組合方案的敏感性差異較大，即使是同一組織類型的腫瘤，對同一藥物的敏感程度也不相同。究其原因傳統治療方法忽略了腫瘤的異質性，對不適合標準藥物治療的患者進行標準化治療，不僅增加了患者的經濟負擔，同時也增加了毒副作用，不利于提高患者的生活質量。

對于粒細胞，作為生物制劑，同一來源的粒細胞對不同腫瘤的殺傷活性不同；同一腫瘤，不同的粒細胞對其的殺傷活性也不同。因此需要切實可行的技術方法篩選出抗癌活性高的粒細胞，為臨床提供治療方案依據

目前國內癌細胞研究多采用癌細胞株的方式，在傳代培養的過程中，隨著培養時間的延長或培養環境的改變，癌細胞的特性會發生改變。這正是體外篩選出的高殺癌活性的藥物或粒細胞往往體內殺癌效果不佳或無效果的原因。與此相反，腫瘤組織的原代培養獲取的腫瘤細胞，最接近和反映體內生長特性，可以為藥物敏感性試驗、免疫學研究、遺傳學特性及腫瘤的治療等提供理想的生物學模型。通過原代培養獲得的腫瘤細胞，作為靶細胞篩選高抗癌活性的粒細胞，對臨床腫瘤的治療具有極好的指導作用，避免憑借臨床經驗盲目用藥，降低抗癌藥物作用的不良反應，為臨床治療提供客觀依據。

發明內容

本發明的目的在于提供個體化的粒細胞抗癌活性檢測，以解決上述背景技術中提出的目前國內癌細胞研究多采用癌細胞株的方式，在傳代培養的過程中，隨著培養時間的延長或培養環境的改變，癌細胞的特性會發生改變。這正是體外篩選出的高殺癌活性的藥物或粒細胞往往體內殺癌效果不佳或無效果的原因的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：個體化的粒細胞抗癌活性檢測，包括以下步驟：

1）腫瘤標本的取材；

2）腫瘤單細胞懸液的制備；

3）去除紅細胞及雜細胞；

4）純化腫瘤細胞；

5）單細胞軟瓊脂克隆團的獲取和細胞培養；

6）粒細胞制備；

7）粒細胞抗癌活性檢測（CKA）。

優選的，所述腫瘤標本的取材為，新鮮無菌癌組織是手術切除的未經放射治療和抗腫瘤化學藥物治療的。取新鮮癌組織1cm3，置于DMEM（含100U/ml青霉素和100ug/ml鏈霉素）中，4℃儲存不超過3小時。置于超凈工作臺中，用無菌生理鹽水將標本組織沖洗3次；用銳利的眼科剪小心剔除可見血管及壞死組織，迅速浸入含有雙抗（青霉素200U/ml，鏈霉素200mg/ml）及二性霉素2mg/ml的D-Hank’s液中。

優選的，所述腫瘤單細胞懸液的制備，其中，