[發明專利]一種厭氧氨氧化菌種的保藏及恢復方法

有效

• 申請號: 201910329646.7
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN110129203B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 范念斯;白昱慧;張權;吳靜;倪紹凱;金仁村
• 申請（專利權）人: 杭州師范大學
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C02F3/28;C02F3/34;C02F101/16;C12R1/01
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種厭氧氨氧化菌種的保藏方法，包括：

(1)將含有厭氧氨氧化菌種的污泥用無機鹽溶液沖洗后保存在保藏容器中；

(2)向保藏容器中加入保護劑混合均勻，去除混合液中的溶解氧后置于4～25℃下保藏；所述保護劑為水和厭氧氨氧化菌的胞外聚合物的混合物，所述厭氧氨氧化菌的胞外聚合物通過蒸汽法提取；

所述蒸汽法的步驟包括：

(I)將厭氧氨氧化污泥清洗后加入水中，離心得到污泥沉淀物；

(II)將污泥沉淀物加入0.9％生理鹽水中，在0.6～1.0MPa、100～110℃下高壓蒸汽滅菌0.5～1.5h后，離心得到的上清液即為厭氧氨氧化菌的胞外聚合物。

2.根據權利要求1所述的厭氧氨氧化菌種的保藏方法，其特征在于，所述無機鹽溶液的組成包括：KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·2H₂O和KHCO₃。

3.根據權利要求1所述的厭氧氨氧化菌種的保藏方法，其特征在于，所述污泥的體積與保藏容器的容積之比為1:1.5～3。

4.根據權利要求1所述的厭氧氨氧化菌種的保藏方法，其特征在于，所述污泥的體積與保護劑的體積之比為1:0.5～2。

5.根據權利要求1所述的厭氧氨氧化菌種的保藏方法，其特征在于，所述厭氧氨氧化菌的胞外聚合物與保護劑的體積比為1:5～10。

6.根據權利要求1所述的厭氧氨氧化菌種的保藏方法，其特征在于，所述去除混合液中的溶解氧的具體方法為向混合液中通入稀有氣體或氮氣，曝氣15～30min。

7.一種厭氧氨氧化菌種的恢復方法，包括：

(a)從權利要求1～6任一權利要求所述的保藏有厭氧氨氧化菌種的保藏容器中取出污泥，用水和所述的無機鹽溶液分別沖洗后置于反應器內，反應器運行條件如下：避光且溫度為30～36℃、水力停留時間為1.5～2h，進水中氨氮和亞硝氮的濃度相同且不大于70mg L^-1；

(b)分階段提升進水中氨氮和亞硝氮的濃度，且每一階段的進水中氨氮和亞硝氮的濃度相同，直至進水中氨氮與亞硝氮的濃度均不小于280mg L^-1，且反應器的總氮去除效率不低于88％，完成厭氧氨氧化菌種的恢復。

8.根據權利要求7所述的厭氧氨氧化菌種的恢復方法，其特征在于，所述進水中還含有KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、MgSO₄·2H₂O、KHCO₃、微量元素濃縮液I和微量元素濃縮液II；

所述微量元素濃縮液I的組分包括EDTA和FeSO₄·7H₂O；

所述微量元素濃縮液II的組分包括EDTA、H₃BO₄、MnCl₂·4H₂O、CuSO₄·5H₂O、ZnSO₄·7H₂O、NiCl₂·6H₂O、NaMoO₄·2H₂O和CoCl₂·6H₂O。