[發明專利]一種菌群絕對定量方法及在中國白酒發酵過程中的應用

有效

• 申請號: 201910329356.2
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN109971822B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 徐巖;吳群;杜如冰
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12Q1/689;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/225
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種白酒發酵體系中菌群含量的絕對定量方法，其特征在于，所述方法是利用Lactobacillus sp.和/或Lactobacillus acetotolerans作為內標來進行絕對定量；當所有白酒發酵體系的待測樣本中，都存在Lactobacillus sp.或Lactobacillus acetotolerans時，則用Lactobacillus sp.或Lactobacillus acetotolerans中的其中1個作為內標即可；當所有白酒發酵體系的待測樣本中，部分沒有Lactobacillus sp.時，該沒有Lactobacillus sp.的待測樣本使用Lactobacillus acetotolerans作為內標來進行絕對定量；當所有白酒發酵體系的待測樣本中，部分沒有Lactobacillus acetotolerans時，該沒有Lactobacillus acetotolerans的待測樣本使用Lactobacillus sp.作為內標來進行絕對定量；

所述白酒是如下任意一種或者多種：清香型白酒、濃香型白酒、醬香型白酒、芝麻香型白酒、豉香型白酒、馥郁香型白酒；

所述絕對定量方法，包括：（1）對待測樣本中的內標進行絕對定量；（2）確定待測樣本中，需要絕對定量的待測菌群與內標的相對含量；（3）根據（1）和（2），換算得到待測菌群的絕對含量；內標Lactobacillus acetotolerans的特異性引物為SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2；內標Lactobacillus sp.的特異性引物為SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述白酒發酵體系的待測樣本，為白酒發酵酒醅。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣本中，需要絕對定量的待測菌群，包括如下任意一種或者多種：總菌群、任意一個菌種，或者任意多個菌種。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述（1）中，對待測樣本中的內標進行絕對定量是通過熒光定量PCR來實現。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述白酒發酵體系的待測樣本，為白酒發酵酒醅；所述（1）中，對待測樣本中的內標進行絕對定量是通過熒光定量PCR來實現。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣本中，需要絕對定量的待測菌群，包括如下任意一種或者多種：總菌群、任意一個菌種，或者任意多個菌種；所述（1）中，對待測樣本中的內標進行絕對定量是通過熒光定量PCR來實現。

7.根據權利要求4-6任一所述的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR所用的引物為內標的特異性引物。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，內標Lactobacillus acetotolerans的特異性引物是基于轉錄調控因子基因序列設計，基因序列NCBI登錄號為WP_082137158.1；內標Lactobacillus sp.的特異性引物是基于16s rRNA基因序列設計，基因序列GeneBank編號為KU674948.1。