[發(fā)明專利]一種由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201910329207.6 | 申請(qǐng)日： | 2019-04-23 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN110024622A | 公開(kāi)（公告）日： | 2019-07-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 高廣磊;趙珮杉;張英;郭米山;任悅;魏曉帥 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京林業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A01G18/40 | 分類號(hào)： | A01G18/40 |
| 代理公司： | 北京凱特來(lái)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11260 | 代理人： | 鄭立明;趙鎮(zhèn)勇 |
| 地址： | 100083 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 子實(shí)體 菌種 大型真菌 轉(zhuǎn)接 制備 鏈霉素 菌柄 菌蓋 培養(yǎng)皿 蒸餾水 馬鈴薯固體培養(yǎng)基 白色絨毛狀菌絲 恒溫培養(yǎng)箱 組織分離法 單一菌種 鋒利刀片 黑暗條件 菌絲萌發(fā) 擴(kuò)大培養(yǎng) 雜菌污染 培養(yǎng)基 滅菌 切取 省力 省時(shí) 沖洗 冷藏 接種 噴灑 酒精 消毒 野外 生長(zhǎng) 觀察 | ||
1.一種由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，包括步驟：
(1)大型真菌子實(shí)體滅菌：將于野外獲取的大型真菌子實(shí)體冷藏帶回，用蒸餾水沖洗后用75％酒精均勻的噴灑于子實(shí)體進(jìn)行消毒；
(2)接種：沿菌柄對(duì)半掰至菌蓋分成兩半，用滅菌的鋒利刀片切取小塊菌柄和菌蓋組織，將其轉(zhuǎn)接到添加鏈霉素的馬鈴薯固體培養(yǎng)基PDA上；
(3)分離純化：于25℃恒溫培養(yǎng)7～10天觀察菌絲萌發(fā)情況，挑取白色絨毛狀菌絲與培養(yǎng)基一起至新制備的PDA培養(yǎng)基中作擴(kuò)大培養(yǎng)，至獲得單一菌種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的大型真菌子實(shí)體需保持新鮮，采摘時(shí)挑選旺盛生長(zhǎng)、菌蓋邊緣內(nèi)卷的幼嫩子實(shí)體作為供試的組織分離材料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的菌柄和菌蓋組織大小為0.5cm×0.5cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的添加鏈霉素的鈴薯固體培養(yǎng)基PDA的配置方法：
稱取去皮馬鈴薯200g切成小塊，同1200mL蒸餾水放入鍋中加熱至沸騰后保持15min后過(guò)濾；
稱取葡萄糖20g，瓊脂15～20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O1.5g于濾液中，并再次加熱至完全溶解，補(bǔ)充水至1000mL；
常規(guī)配置的PDA培養(yǎng)基滅菌處理后轉(zhuǎn)移至后超凈工作臺(tái)中冷卻，待50℃時(shí)混入0.2g鏈霉素充分搖勻，并趁熱倒入已滅菌的100mm培養(yǎng)皿中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的滅菌條件均為高溫高壓滅菌，將刀片、常規(guī)配置的PDA培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿放入高壓滅菌鍋中滅菌，121℃保持30min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的超凈工作臺(tái)需事先進(jìn)行酒精擦拭、紫外線滅菌和通風(fēng)處理工作。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，所述的接種、擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程和倒平板在關(guān)閉紫外線和通風(fēng)處理的超凈工作臺(tái)中進(jìn)行，并始終保持靠近酒精燈火焰附近。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的恒溫培養(yǎng)于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)過(guò)程中保持黑暗無(wú)光照。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的白色絨毛狀菌絲為目標(biāo)子實(shí)體的真菌菌絲，在培養(yǎng)過(guò)程中易受到霉菌、細(xì)菌污染，在挑取菌絲過(guò)程中選擇距離污染點(diǎn)遠(yuǎn)的菌絲，同時(shí)轉(zhuǎn)移的菌絲應(yīng)包含部分培養(yǎng)基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的由大型真菌子實(shí)體轉(zhuǎn)接菌種的制備方法，其特征在于，所述的分離純化過(guò)程無(wú)次數(shù)限制，重復(fù)進(jìn)行，直至獲得純菌種。
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