[發(fā)明專利]一種溫敏凝膠制劑及低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910328218.2
• 申請(qǐng)日: 2019-04-23
• 公開（公告）號(hào): CN110037010B
• 公開（公告）日: 2021-08-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚情;趙應(yīng)征;徐荷林;寇龍發(fā);魯翠濤;江雪;黃志偉;鄭雅文;王麗芬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 溫州醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N1/02
• 分類號(hào): A01N1/02
• 代理公司: 溫州名創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33258
• 代理人: 陳加利

本發(fā)明屬于凝膠制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種溫敏凝膠制劑及低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞的方法，其中，溫敏凝膠制劑在現(xiàn)有配方含有明膠作為基礎(chǔ)凝膠成分的基礎(chǔ)上，增加了脫細(xì)胞基質(zhì)、蘆薈提取物和膽紅素，基于肺脫細(xì)胞基質(zhì)、蘆薈提取物、明膠凝膠因子在低溫自組裝形成超分子凝膠，可低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞，維持胰島細(xì)胞的活性，生物相容性好，且便于運(yùn)輸，方便實(shí)用，解凍后可以直接用于體內(nèi)的胰島細(xì)胞移植。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于凝膠制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種溫敏凝膠制劑及低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

糖尿病是常見的內(nèi)分泌疾病，據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)盟公布數(shù)據(jù)顯示，全球糖尿病患者目前已達(dá)3.82億人，而我國(guó)糖尿病患病人數(shù)居全球之首，占全球患者總數(shù)的三分之一。胰島細(xì)胞移植就是摘取人或動(dòng)物的胰腺器官，經(jīng)過消化、分離和提取純化胰島細(xì)胞以后將具有胰島素分泌功能的細(xì)胞，經(jīng)過血管移植到糖尿病患者的肝臟內(nèi)，在藥物的保護(hù)下控制排斥反應(yīng)，當(dāng)這些細(xì)胞在患者體內(nèi)存活后，便能發(fā)揮正常的胰島素分泌功能，從而達(dá)到勿需注射或僅少量注射胰島素，便能控制血糖的目的，是治療糖尿病的有效手段，但是由于每一次分離得到的活體細(xì)胞數(shù)量很難滿足一次臨床移植的需要，因此胰島細(xì)胞的保存是胰島移植需要研究的重要課題。

低溫凍存是目前保存細(xì)胞或組織最普遍的方法，即往含有活細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液中加入一定量的凍存保護(hù)劑，然后以一定的速率降至某一溫度，并將活細(xì)胞或組織保存在該溫度下一定時(shí)間。在凍存過程中，細(xì)胞內(nèi)的新陳代謝被抑制，細(xì)胞或組織的活性“暫停”，所以細(xì)胞或組織得以長(zhǎng)期保存，待需要使用時(shí)再將其復(fù)溫，細(xì)胞或組織的活性和功能可恢復(fù)正常。目前的方法主要有玻璃化冷凍保存和慢速冷凍保存兩種。在低溫凍存過程中，細(xì)胞內(nèi)外形成的冰晶會(huì)對(duì)小鼠胰島細(xì)胞造成損傷，而且在凍存保護(hù)劑添加過程細(xì)胞內(nèi)外滲透壓的變化也會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害。雖然這兩種方法能在一定程度上降低細(xì)胞受到的冰晶損傷，但是在凍存過程中細(xì)胞直接或間接地暴露在凍存保護(hù)劑中，所以細(xì)胞毒性較大，細(xì)胞的存活率和功能受到了一定的影響。

超分子凝膠是一類由低分子量的凝膠因子聚集而形成的軟物質(zhì)，它是低分子量凝膠因子在一定環(huán)境條件下自組裝形成的超分子化合物。凝膠因子自組裝形成超分子凝膠的驅(qū)動(dòng)力包括氫鍵、π-π堆積、親疏水相互作用、靜電相互作用等非共價(jià)相互作用。當(dāng)外界刺激(如pH變化、環(huán)境溫度、磁信號(hào))發(fā)生變化時(shí)，超分子凝膠能夠快速且自發(fā)地對(duì)外界刺激做出響應(yīng)，由于這些非共價(jià)相互作用具有可逆性，所以超分子凝膠對(duì)外界刺激的響應(yīng)變化通常都是可逆的。而且，生物體中的凝膠體系多由弱相互作用構(gòu)成，所以與聚合物凝膠相比，超分子凝膠的結(jié)構(gòu)更接近于生物體，具有更好的生物相容性，因而被廣泛用于生物醫(yī)用材料、生物傳感器等領(lǐng)域。但是，鮮有超分子凝膠制劑應(yīng)用于低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞的相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，而提供一種溫敏凝膠制劑及低溫長(zhǎng)期保存胰島細(xì)胞的方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案如下：本發(fā)明提供一種溫敏凝膠制劑，包括以下質(zhì)量份數(shù)的組分：

肺脫細(xì)胞基質(zhì) 20~50份；

蘆薈提取物 5~50份；

明膠 30~50份；

膽紅素 1~10份；

還包括溶解液，所述肺脫細(xì)胞基質(zhì)在制劑中的含量為20~50 mg/ml。

所述蘆薈提取物由以下方法制備得到：將新鮮蘆薈葉洗凈、去皮、滅菌，放入細(xì)胞破碎機(jī)粉碎，加入果膠酶（優(yōu)選2%）進(jìn)行酶解（在37°C恒溫水浴攪拌30分鐘），加入活性炭進(jìn)行吸附（攪拌30分鐘），冷凍離心過濾得到澄清液體后，冷凍干燥得到的干燥粉末為所述蘆薈提取物。