[發明專利]一種檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒

在審

• 申請號: 201910326879.1
• 申請日: 2019-04-22
• 公開（公告）號: CN110004241A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 鄧珊珊;賈旭;劉超
• 申請（專利權）人: 成都醫學院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

本發明提供了一種檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒，所述試劑盒包括多重PCR引物，其序列分別如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4、SEQ ID NO.5～6所示。本發明通過合理的引物搭配，能排除大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌的干擾，實現鮑曼不動桿菌的特異性檢測。本發明還具有很高的檢測靈敏度，當樣品中的鮑曼不動桿菌DNA濃度低至1pg/μL時，仍能檢測到鮑曼不動桿菌。

技術領域

本發明涉及分子檢測領域，尤其涉及一種檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒。

背景技術

不動桿菌屬(Acinetobacter)為一群嚴格需氧型革蘭氏陰性球桿菌，目前該菌屬至少包含33個基因種，其中，最主要的感染菌種是鮑曼不動桿菌，約占72.9％。鮑曼不動桿菌廣泛分布于自然界中，是引起多種院內感染的重要致病菌。其危險因素包括呼吸機依賴、機械通氣、氣管插管、侵入性操作、ICU環境、醫務工作者手的交叉感染等。鮑曼不動桿菌患者死亡率高，預后差，可引起院內眾多感染包括醫院獲得性肺炎尤其是呼吸機相關性肺炎，血液，泌尿道，傷口感染腦膜炎等，常有較高的死亡率和發病率。由于醫院重癥監護室里患者的免疫力與抵抗力低下，極易引發多重耐藥鮑曼不動桿菌的感染與流行，甚至可能爆發院內感染，給臨床治療帶來相當大的困難。

目前，大量的臨床資料表明，快速準確確診病原菌，給予合理而規范的抗生素治療，對于節省治療時間和確定最佳治療方案是非常重要的。

傳統的藥敏性實驗通常會耗費2、3天時間，會嚴重耽擱治療的進程和效果。

發明內容

為了解決上述問題，本發明提供了一種檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括多重PCR引物，其序列分別如SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4、SEQ IDNO.5～6所示。

如前所述檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒，它還包括Taq聚合酶、dNTP、MgCl₂、PCR緩沖液、去離子水。

如前所述的試劑盒，所述檢測鮑曼不動桿菌的PCR試劑盒還包括鮑曼不動桿菌DNA陽性對照品。

本發明還提供了前述試劑盒的使用方法，包括如下步驟：

1)DNA提取；

2)PCR反應；

3)電泳檢測PCR產物；

若步驟3)檢測到3個條帶，即判斷為檢測到鮑曼不動桿菌。

如前述的使用方法，所述PCR反應的條件為：在94℃下預變性5min后，進行一下擴增循環：在94℃下變性30s，在55℃下退火30s，在72℃延伸30s，反應30個循環，最后在72℃延伸5min。

如前述的使用方法，所述電泳是在1.5％的瓊脂糖膠中進行的電泳。

如前述的使用方法，所述3個條帶的大小分別為191、347、524bp。

本發明通過合理的引物搭配，能排除大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和肺炎克雷伯菌的干擾，實現鮑曼不動桿菌的特異性檢測。

本發明還具有很高的檢測靈敏度。當樣品中的鮑曼不動桿菌DNA濃度低至1pg/μL時，仍能檢測到鮑曼不動桿菌。

顯然，根據本發明的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本發明上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過具體實施方式對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。

附圖說明