[發明專利]一種海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法

有效

• 申請號: 201910326588.2
• 申請日: 2019-04-23
• 公開（公告）號: CN110036950B
• 公開（公告）日: 2021-07-30
• 發明（設計）人: 任貽超;趙春彥
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10;A01K61/17
• 代理公司: 山東濟南齊魯科技專利事務所有限公司 37108
• 代理人: 趙明媚

1.一種海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)選取國內冷水性的淡水養殖的虹鱒親本為父本，選取從國外引進的三倍體硬頭鱒，通過生長指數和流式細胞儀連用的方法，從三倍體中甄選可育二倍體鱒魚親本作為母本，進行國內虹鱒和國外進口鱒魚的雜交；

(2)在國內淡水虹鱒繁殖期，挑選體格強健的2-3齡、體重600-800g的雄性虹鱒，采集精液，采用精液冷凍方法保存淡水養殖的虹鱒精液，冷凍保存之前，鏡檢觀察精液活化情況，將鏡檢合格的精液進行凍存；

精液冷凍保存的方法如下：配制冷凍液，將冷凍液提前放在4℃預冷，對鏡檢合格的精液進行凍存，凍存的方法為：將精液與提前預冷的4℃的冷凍液按照1:3的體積比混合，稀釋精液，放入凍存管中，2-10min后，將凍存管置于液氮表面以上4厘米處10分鐘，然后投入液氮中；所述冷凍液的配方為：6.52mg/ml NaCl，0.8mg/ml KCl，2mg/ml NaHCO₃，2mg/ml葡萄糖，4mg/ml牛血清白蛋白，12％v/v DMSO，3％v/v甘油；

鏡檢方法為：用65mM/L NaHCO₃和50mM/LTris，pH 8.8組成的活化液活化精液，用顯微鏡在10倍鏡下鏡檢，排除精子運動活力百分率≤90％的精液；

(3)將凍存的精液在人工授精前運輸至全雌二倍體鱒魚養殖車間，選取體格健壯的性成熟的雌性個體，采集卵子，將復蘇的冷凍精液與卵子混勻，輕輕攪動使精卵混合均勻，然后洗去多余精液；將授精后的卵子置于塑料容器中，卵子距離水面3-5cm，采用流水培養，期間不斷剔除授精失敗發白的卵子，保持水溫維持9℃-12℃，直至發眼卵出現；

精液復蘇的方法為：精液從液氮取出后，置于液氮上方5cm處放置5分鐘，然后將精液置于溫水浴中5-10s后取出，將精液與活化液按照2：1的體積比混合，輕輕搖動，在顯微鏡下鏡檢活力，當60％的精液出現活力時，可以使用；所述活化液由65mM/L NaHCO₃和50mM/LTris配制而成，pH為8.8。

2.根據權利要求1所述的海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：步驟(1)中，所述國內冷水性的淡水養殖的虹鱒從山東西部山區購進。

3.根據權利要求1所述的海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：步驟(1)中，所述三倍體硬頭鱒從丹麥引進。

4.根據權利要求1所述的海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：步驟(2)中，鏡檢合格的精液是指精子運動活力百分率大于90％的精液。

5.根據權利要求1所述的海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：步驟(3)中，流水培養的水溫維持在10℃。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，其特征在于：所述海水養殖虹鱒的人工雜交育種方法，還包括步驟(4)：進行鹽度馴化，獲得海水養殖鱒魚新品系。