[發(fā)明專利]通用型CAR-T細胞、其制備及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910323948.3
• 申請日: 2019-04-22
• 公開（公告）號: CN111826352A
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李俊;張鵬潮;徐昭;何玲;劉偉康;江雨辰;秦含笑;夏宇
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州方德門達新藥開發(fā)有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 上海專利商標事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 韋東

本發(fā)明通過在CAR?T細胞中表達相關(guān)功能蛋白，下調(diào)細胞表面HLA?I類分子，從而制備得到通用型CAR?T細胞。本發(fā)明還涉及這類通用型CAR?T細胞的應(yīng)用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及通用型CAR-T細胞、其制備及應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著腫瘤治療的發(fā)展，嵌合抗原受體T細胞(Chimeric antigen receptor-T，CAR-T)免疫療法逐漸成為備受關(guān)注的治療手段。CAR-T細胞所表達的CAR一般包含胞外抗原結(jié)合域、跨膜域和胞內(nèi)信號傳導域。通常CAR-T細胞是由患者T細胞經(jīng)CAR基因轉(zhuǎn)導并擴增而來，最后再回輸?shù)皆摶颊唧w內(nèi)。CAR-T細胞可以有效的識別腫瘤抗原，引起特異性的抗腫瘤免疫應(yīng)答，而不受主要組織相容性復合體(major histocompatibility complex，MHC)的限制。目前，美國FDA已經(jīng)批準了兩款自體CAR-T細胞產(chǎn)品上市，分別是諾華的Kymriah和凱特的YesCAR-Ta，用于難治性復發(fā)性非霍奇金淋巴瘤和急性淋巴細胞白血病的治療。大量臨床試驗證明，CAR-T作為個性化的活細胞藥極具抗腫瘤潛力(Maude et al.2018；Park etal.2018；Schuster et al.2017；)。

傳統(tǒng)的CAR-T制備及回輸策略是采集患者或供者的外周血，進行T細胞分離，通過慢病毒或逆轉(zhuǎn)錄病毒等方式將包含CAR結(jié)構(gòu)的質(zhì)粒或mRNA轉(zhuǎn)染到細胞內(nèi)，進行擴大培養(yǎng)再回輸?shù)交颊唧w內(nèi)。每位患者的CAR-T需要單獨制備，成本較高且不確定因素較多。如分離得到的細胞不足、患者T細胞功能失常、CAR-T細胞制備失敗、CAR-T細胞制備中患者疾病進程較快等因素，都可能造成CAR-T治療失敗。因此，需要健康供者T細胞制備通用型CAR-T解決上述困擾。為了有效制備通用型CAR-T，需要解決2個問題：①因為異體T細胞表面的TCR(Tcell receptor，TCR)會識別患者的異體抗原，從而導致同種異體T細胞回輸帶來的移植物抗宿主反應(yīng)(graft-versus-host disease，GVHD)；②宿主的免疫系統(tǒng)會識別異體細胞表面的HLA(human leukocyte antigen)，從而導致回輸?shù)漠愺wT細胞被快速清除，影響通用型CAR-T療效。

目前傳統(tǒng)制備通用型CAR-T的方式是通過基因編輯的方式敲除同種異體CAR-T細胞表面的TCR以及HLA-I類分子的表達，以減少GVHD和宿主排斥。已報道多種基因敲除編輯技術(shù)(zinc-finger nucleases，ZFN；transcription activator-like effectornucleases，TALENs；clustered regularly interspaced short palindromic repeats，CRISPR)在通用型CAR-T方面的應(yīng)用(Provasi et al.2012；Berdien et al.2014；Ren etal.2017)。基因編輯雖然給細胞療法帶來了很多可能性，但同樣也存在很多未知的風險和障礙，例如脫靶導致錯誤的基因編輯，工藝繁瑣等等。而且，雖然通過基因編輯方式敲除異體T細胞表面的HLA-I能解決患者一部分的排斥反應(yīng)，但完全敲除HLA-I的異體CAR-T細胞易受到患者的NK(natural killer cell)細胞的攻擊，同樣影響了通用型CAR-T的療效(Torikai et al.2013)。因此通過基因編輯方式制備通用型CAR-T的開發(fā)之路遇到了一定的阻礙，找尋一種新型的工藝簡便、實用安全的蛋白翻譯水平調(diào)控的非基因編輯方式制備通用型CAR-T至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種CAR-T細胞，其含有特異性靶向腫瘤抗原的嵌合抗原受體和能下調(diào)細胞表面HLA-I類分子表達的功能蛋白。

在一個或多個實施方案中，該CAR-T細胞細胞表面HLA-I類分子的表達水平為表達相同嵌合抗原受體但未表達所述功能蛋白的對照CAR-T細胞的50％以下。