[發明專利]一種提高植物乳桿菌在口香糖制備及貯藏過程中穩定性的方法

在審

• 申請號: 201910323614.6
• 申請日: 2019-04-22
• 公開（公告）號: CN110037157A
• 公開（公告）日: 2019-07-23
• 發明（設計）人: 崔樹茂;章金怡;高舒曼;張薛鍵;董亞欣;采岳翠;毛丙永;趙建新;張灝;陳衛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A23G4/10
• 分類號: A23G4/10;A23G4/12;A23L3/3562
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發明公開了一種提高植物乳桿菌在口香糖制備及貯藏過程中穩定性的方法，屬于微生物技術領域。此方法為在菌液凍干前進行熱應激處理，增強菌種對環境的耐受能力，同時添加保護劑和包埋劑，減少菌種在凍干過程中的損傷；利用此方法制備得到的預防齲齒的益生菌制備存活率90％以上，且口香糖在室溫下存儲6個月后，存活率仍能達到50％以上。

技術領域

本發明涉及一種提高植物乳桿菌在口香糖制備及貯藏過程中穩定性的方法，屬于微生物技術領域。

背景技術

目前患有齲齒的人數越來越多，并且患者分布在各個年齡段。如不及時治療，病變繼續發展，形成齲洞，終至牙冠完全破壞消失。齲病是由含糖食物、致齲細菌和易感宿主在時間的催化下共同作用的結果飲食中含有的糖，特別是蔗糖，是導致齲齒最重要的飲食原因。含糖食物在口腔中保留時間過長，致齲細菌就會代謝這些糖類產生有機酸尤其是乳酸，侵蝕牙齒外圍的牙釉質，破壞牙體結構。而食用一些不含糖或含有糖替代物的食物，比如木糖醇口香糖，可以顯著減少甚至逆轉牙齒的脫礦化作用。

其中細菌是齲病發生的必要條件，一般認為致齲菌有兩種類型，一種是產酸菌屬，其中主要為變形鏈球菌、放線菌屬和乳桿菌，可使碳水化合物分解產酸，導致牙齒無機質脫礦；另一種是革蘭陽性球菌，可破壞有機質，經過長期作用可使牙齒形成齲洞。齲病理論上講是口腔中菌群失調引起的，因此，嘗試使用來恢復調節口腔中的菌群平衡不失為一種良好的選擇。植物乳桿菌FB-T9是已被報道過對齲病有防治作用的菌株(見文獻：黃銀.植物乳桿菌FB-T9對齲病的防治作用研究[D].)

目前通過真空冷凍干燥法來制備凍干粉，真空冷凍干燥(簡稱凍干)是制備和保存生物材料最有效的方法之一。凍干是冷凍和干燥技術的有機結合。由于細胞在凍干過程中要經受冷凍和干燥兩種激烈因素的作用，不可避免會有所損傷，但若在凍干時采取一定的保護措施，加入適宜的保護劑系統可在很大程度上減輕或避免冷凍干燥對細胞帶來的損傷。其機理在于保護劑可以改變生物樣品冷凍干燥時的物理、化學環境，減輕或防止冷凍干燥或復水對細胞的損害，盡可能保持原有的各種生理生化特性和生物活性。然而，根據田芬等人(田芬,陳俊亮,霍貴成.益生菌凍干保護劑優化及菌粉保存穩定性研究[J].食品科技,2012,37(02):15-19.)的研究在加入保護劑后活菌數會下降1～2個數量級，死亡率過高。

菌株熱應激修飾方法是采用熱處理對乳酸菌株進行定向改造的一種物理方法。篩選后的益生菌菌株經熱應激修飾后，盡可能多的保留酶活力，熱應激修飾菌株能夠提高菌的存活率，同時在使用時操作簡便，不需要增添額外的設備。但是對于熱應激處理的時期和條件，還尚未得到很好的研究。

利用微膠囊包埋技術保護益生菌也是目前國內外研究的熱點。微膠囊包埋可保護益生菌免受噬菌體的侵害，提高其在冷凍干燥過程中的存活率，增加貯存過程中的穩定性。將益生菌用微膠囊技術包埋在壁材內，也可以降低外界環境對細胞的損傷。在包埋的微囊技術中，包埋不同的細胞或組織需要采用不同孔徑的微囊，以滿足不同分子量的物質通過的需要。因此，微囊孔徑的大小是非常重要的指標?，F有技術中的APA微囊的主要原料是海藻酸鈉和聚賴氨酸，在海藻酸鈉的分子量確定的條件下，APA微囊的孔徑主要決定于聚賴氨酸的分子量。但是，由于聚賴氨酸的分子量不易控制，所以很難制備出不同孔徑的APA微囊。而且APA微囊的表面結構呈條索狀，造成APA微囊的孔徑分布不均勻，影響其通透性。此外，聚賴氨酸的制備工藝相當復雜，特別是在制備大量微囊細胞或組織時，其價格昂貴，難以在臨床大量推廣應用。并且海藻酸鈉在實際使用過程中還受到一些條件的制約，在螯合劑(如磷酸、乳酸和檸檬酸)存在的情況下，由于螯合劑對鈣的親和性比海藻酸鈣強，使得海藻酸鈣不穩定，因此在囊化的益生菌培養過程中會遇到膠粒的穩定性問題，使得細胞從膠粒中釋放出來。

發明內容

本發明的一種目的是提供一種提高植物乳桿菌在益生菌口香糖制備及貯藏過程中穩定性的方法，是先對添加保護劑的植物乳桿菌菌液進行熱應激處理，再將熱應激處理后的菌液與包埋劑混合。