[發明專利]羅非魚氧化應激肝損傷模型及其構建方法和應用

在審

• 申請號: 201910322618.2
• 申請日: 2019-04-22
• 公開（公告）號: CN110074059A
• 公開（公告）日: 2019-08-02
• 發明（設計）人: 賈睿;殷國俊;曹麗萍;杜金梁
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院淡水漁業研究中心
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 余俊杰

本發明公開了羅非魚氧化應激肝損傷模型及其構建方法和應用，所述方法采用注射H₂O₂構建損傷模型。其優點在于：(1)本發明所述方法使用的羅非魚來源一致，培養環境可控，因此可重復性強；(2)本發明所述方法首次將H₂O₂應用于魚類肝損傷模型構建中，得到了能夠研究肝臟疾病發病機制以及篩選相關治療藥物的理想羅非魚實驗模型。

技術領域

本發明屬于水產養殖技術領域，涉及一種魚類損傷模型的構建方法，具體為羅非魚氧化應激肝損傷模型及其構建方法和應用。

背景技術

肝臟是魚類物質和能量代謝的主要器官，也是機體重要的屏障器官，其解毒和吞噬功能對機體具有保護作用。肝損傷或病變往往導致機體代謝機能紊亂和抗病力降低，極易造成繼發傳染性疾病的爆發。近年來肝膽綜合癥、脂肪肝病和化學性肝損傷等肝臟疾病在多種魚類中頻繁發生，死亡率達50％-60％，病因復雜，但共同點為均伴隨著嚴重的氧化應激(oxidative stress)。水環境中多種脅迫因子，如氨氮、亞硝酸鹽、有機毒物、重金屬等也可引起氧化應激，并導致魚類肝損傷發生。因此，氧化應激被認為是魚類多種肝損傷疾病的共同誘發因素。

肝損傷模型是為更好的研究肝臟疾病發病機制以及篩選相關治療藥物而構建的一種理想動物實驗模型。然而在魚類中，關于肝損傷模型研究還比較少，因此嚴重制約魚類肝損傷機制以及保肝藥物的篩選和開發。目前，尚未發現有關魚類氧化應激肝損傷模型的構建方法。

過氧化氫(H₂O₂)是重要的氧自由基(ROS)之一，可引起細胞膜氧化損傷。在哺乳動物和人肝細胞研究中，研究者利用H₂O₂誘導肝細胞建立氧化損傷模型，并通過此模型篩選多種保肝藥物。但目前尚未發現采用H₂O₂誘導魚類肝損傷的相關報道。

發明內容

解決的技術問題：為了克服現有技術的不足，為了更好的研究肝臟疾病發病機制以及篩選相關治療藥物而構建的一種理想動物實驗模型，本發明提供了羅非魚氧化應激肝損傷模型及其構建方法和應用。

技術方案：羅非魚氧化應激肝損傷模型的構建方法，所述方法包括以下步驟：

第1步、馴化

將健康的羅非魚養殖于循環水系統中，馴化2周，馴化期間投喂基礎飼料，養殖條件為：溫度30±2℃，溶氧>6mg/L，pH 7.4–8.1，氨氮含量<0.2mg/L，亞硝酸鹽含量<0.2mg/L；

第2步、誘導

取第1步馴化后的羅非魚，腹腔注射H₂O₂，注射劑量為1-3mL/kg，H₂O₂的濃度為40-400mM；

第3步、檢測

注射24～72h后，麻醉后采集血液和肝組織，在血液中測定肝損傷指標：谷草轉氨酶與谷丙轉氨酶；在肝組織中測定氧化應激指標：過氧化物歧化酶和丙二醛；通過病理切片分析肝組織損傷程度。

優選的，第1步中，按重量份計，基礎飼料為：粗蛋白28份，粗脂肪5份,灰分15份,粗纖維12份,磷元素0.6份和水12.5份。

優選的，第2步中，H₂O₂的濃度為300mM，注射劑量為3mL/kg。

優選的，第3步中，對肝損傷指標和氧化應激指標的測定數據使用SPSS20.0軟件進行數據分析，并通過One-way ANOVA分析，對不同組間數據進行Tukey多重比較。

以上任一所述方法構建的羅非魚氧化應激肝損傷模型。