[發明專利]一種斑馬魚腦創傷模型及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201910320119.X
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110178757B
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 張晶晶;甘達青;伍水龍;李炎玉
• 申請（專利權）人: 廣東醫科大學附屬醫院
• 主分類號: A01K61/10
• 分類號: A01K61/10
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 劉瑤云;陳偉斌

本發明公開了一種斑馬魚腦創傷模型及其制備方法和應用。一種斑馬魚腦創傷模型的制備方法，對3dpf時期的胚胎，在斑馬魚后腦戳空針，并且，其小膠質細胞被熒光蛋白標記。在本法發明中，使用臨床一線消炎藥物干預后，可激活更多的小膠質細胞往創傷部位遷移和聚集，從而促進創傷后腦部的修復，小膠質細胞轉基因斑馬魚腦創傷模型能夠用于快速篩藥，這為企業藥物研發及消炎藥在臨床腦部創傷、腦炎等疾病的療效評估提供了一種經濟便利可靠的研究模型，具有很好的應有前景和價值。

技術領域

本發明涉及動物模型構建技術領域，更具體地，涉及一種斑馬魚腦創傷模型及其制備方法和應用。

背景技術

斑馬魚(Daniorerio)是國際認可的實驗用魚，它具有個體小、易養殖、體外受精、發育快、繁殖能力強、胚胎透明、性成熟周期短、遺傳背景清楚等諸多特點成為功能基因組時代生命科學研究中的重要模式動物之一，以及可針對治療藥物進行高通量篩選等諸多特點，使其成為后基因組時代生命科學研究中重要的模式脊椎動物之一。

創傷性腦創傷(Traumatic brain injury，TBI)是當今生活中全球死亡和殘疾的主要原因，也是一個全球范圍內尚未解決的重大公共衛生課題。創傷性腦創傷造成的機械損傷會引起神經元出現一連串的機體反應，導致神經細胞死亡，腦水腫和神經功能缺陷。理想的顱腦創傷動物模型是研究顱腦創傷機制及其診療方法的重要基礎平臺。

但是目前尚無合適的用于醫學研究的創傷性腦創傷模型。雖然目前國內外用小鼠等動物作為研究對象已經開發了一系列顱腦創傷的模型，但是以斑馬魚幼魚為研究對象建立腦創傷模型的相關研究，目前來說相對比較少，所以急需建立斑馬魚幼魚腦創傷模型，為以后研究藥物篩選和人腦創傷修復機制等方面具有重大的意義。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種斑馬魚腦創傷模型及其制備方法和應用。

本發明的第一個目的是提供一種斑馬魚腦創傷模型的制備方法。

本發明的第二個目的是提供所述制備方法制備得到的斑馬魚腦創傷模型。

本發明的第三個目的是提供所述斑馬魚腦創傷模型的應用。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

在脊椎動物發育生物學研究方面，斑馬魚具有以下優點：成魚個體小,繁殖快，便于養殖；產卵周期短，產卵量大，受精卵大；早期胚胎完全透明，因而易于觀察內部結構，因此選擇斑馬魚構建腦創傷模型。因為斑馬魚固有免疫在受精后48h才出現，而適應性免疫在受精后4～6w出現，因此，此次選擇3dpf的胚胎進行造模。根據轉基因斑馬魚腦部小膠質細胞的分布情況來看，大部分小膠質細胞分布在中腦，在前腦和后腦分布相對較少。由于中腦小膠質細胞很多，從觀察中分辨不出創傷部位是否存在有明顯的聚集現象。同時考慮到前腦的解剖特點，占整個腦部的空間小且所處位置不易于創傷的操作。而在正常生理情況下，小膠質細胞在后腦的分布數量相對少，同時后腦在整個斑馬魚腦部所占的空間較大，所處的解剖位置易于實驗的操作，因此，最后決定創傷組創傷的部位在后腦。

因此本發明要求保護一種斑馬魚腦創傷模型的制備方法，對3dpf時期的胚胎，在斑馬魚后腦戳空針，并且，其小膠質細胞被熒光蛋白標記。

優選地，所述斑馬魚為綠色熒光蛋白標記的小膠質細胞轉基因斑馬魚coro1a:EGFP。

實際應用時往往選擇右后腦進行戳空針，以方便儀器注射。

優選地，戳空針40°～50°進針，深度50～100μm。

更優選地，戳空針45°進針，深度88μm。

優選地，所述斑馬魚通過顯微注射進行戳空針。

優選地，顯微注射針的針口直徑為22μm。