[發明專利]一種蘿卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球

有效

• 申請號: 201910319515.0
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110066776B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 陳封政;陳建明;李書華;張利兵
• 申請（專利權）人: 樂山師范學院;成都格純生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N11/14;C12P11/00
• 代理公司: 成都正華專利代理事務所(普通合伙) 51229
• 代理人: 李蕊

本發明公開了一種蘿卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球，該方法包含：(1)西蘭花種子加熱翻炒，榨油除去油脂，得到油枯餅；(2)將油枯餅粉碎成小顆粒，于水中浸泡提取，得到蘿卜硫苷提取液；(3)向蘿卜硫苷提取液中加入黑芥子酶磁性微球，酶解，用磁鐵吸附回收黑芥子酶磁性微球，得到蘿卜硫素提取液；(4)采用二氯甲烷萃取蘿卜硫素，得到含有蘿卜硫素的二氯甲烷萃取液，濃縮；(5)將濃縮液用乙腈溶解，傾倒出上清液，濃縮，再得到濃縮液；(6)將步驟(5)得到的濃縮液用食用乙醇溶解，傾倒出上清液，濃縮，得到蘿卜硫素。本發明的方法通過固化的黑芥子酶磁性微球為催化劑，將蘿卜硫苷水解成蘿卜硫素，蘿卜硫素純度高達95％。

技術領域

本發明屬于天然產物提取技術領域，具體涉及一種蘿卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球。

背景技術

西蘭花是一種廣受歡迎的蔬菜，其種子含有蘿卜硫苷，蘿卜硫苷在西蘭花種子自身含有的黑芥子酶的作用下，降解為蘿卜硫素，蘿卜硫素是迄今為止蔬菜中發現的抗癌效果最好的活性物質，具有多種生理活性。日本營養學家福家洋子教授等通過試驗驗證蘿卜硫素有治療癌癥的作用；英國科學家發現蘿卜硫素將有助于人們對癌細胞的抵抗能力，降低患癌癥的危險；美國約翰霍普金斯大學醫學院的Brassica Chemooprotection實驗室發現蘿卜硫素可激活人體自身的抗癌物質；日本金澤大學的大田嗣人發現蘿卜硫素具有抑制肥胖的作用；日本千葉大學社會精神保健教育中心于2016年8月宣布蘿卜硫素具有預防抑郁癥和抑郁癥復發的功效；瑞典哥德堡大學研究成果發表在2017年6月的國際頂級刊物《Science Translational Medicine》上：發現蘿卜硫素具有降血糖的功效。

2015年3月我國國家食品藥品監督管理總局受理了美國Brassica公司的“西蘭花種子提取物”為新食品原料(衛食新進申字(2015)第0002號)的申請，并于2017年6月8日正式批準“西蘭花種子提取物”為新食品原料。

目前，國內外對蘿卜硫素的提取工藝主要采用西蘭花種子粉末中加大量水，利用其自身的黑芥子酶的作用將蘿卜硫苷水解為蘿卜硫素，再經過多次萃取、分離得到純的蘿卜硫素，此方法存在收率低、成本高等問題，一般每公斤西蘭花種子得到0.5～1克左右的蘿卜硫素，即產率為0.05％～0.1％，溶劑消耗量為西蘭花種子重量的20倍左右，且種子在存放過程中有效成分會逐漸大幅降低。

而且，現有的方法得到的蘿卜硫素的純度較低，如中國專利CN108048498A，公開了一種蘿卜硫素提取工藝，該工藝提取的蘿卜硫素含量在20.8％，經過硅膠柱層析后蘿卜硫素含量為30.1％。如中國專利CN102898341A，公開了一種高純度蘿卜硫素的提取純化方法，該方法獲得的蘿卜硫素純度為60％。如中國專利CN101544995A，公開了一種蘿卜硫素的提取方法，該方法提取的蘿卜硫素純度為2.91％，經過硅膠柱層析后純度為24.30％，經過反相硅膠柱層后純度為95.10％，但是產率極低，1.0kg西蘭花干燥種子才能得到937.5mg純度為95.10％的蘿卜硫素，即產率為0.094％。

發明內容

本發明的目的是提供一種蘿卜硫素的提取方法及黑芥子酶磁性微球，該方法解決了現有方法收率低的問題，能夠得到高純度的蘿卜硫素。

為了達到上述目的，本發明提供了一種黑芥子酶磁性微球的制備方法，該方法包含：

(1)將氯化鐵、醋酸鈉和聚醚酰亞胺于乙二醇中，超聲，然后在150～250℃下反應，待反應結束后，磁場分離(外加磁鐵吸附)，獲得四氧化三鐵磁性微球；

(2)將西蘭花種子于液氮中研磨成粉，加入Tris-HCl緩沖液，攪拌，過濾，濾液于0～4℃條件下離心，收集上清液，該上清液為黑芥子酶的粗提液，向黑芥子酶的粗提液中加入乙醇，攪拌，在4℃條件下離心，收集上清液，4℃條件下透析，經過透析后的液體為西蘭花種子中的黑芥子酶液；