[發明專利]一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法

有效

• 申請號: 201910318399.0
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN109913416B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 王靈娟;張怡;劉艷青
• 申請（專利權）人: 天晴干細胞股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 岳泉清

1.一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于該配制方法按以下步驟進行：一、配置緩沖液：稱取氯化鈉3～3.5g、氯化鉀0.1～0.2g、氯化鎂0.1～0.2g、醋酸鈉1～1.5g、枸櫞酸鈉0.2～0.3g、葡萄糖酸鈣0.3～0.4g和海藻糖0.2～0.3g；然后將氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、枸櫞酸鈉依次溶于480～520mL去離子水中，攪拌至完全融化，加入葡萄糖酸鈣和海藻糖，攪拌至溶解，靜止8～12min，加入醋酸鈉，攪拌均勻，靜止4～6min,調節pH值在7.0-7.2之間，得到緩沖液；二、去除纖維蛋白的血漿：向血漿中加入氯化鈣溶液，振搖4～6min，通過密度梯度離心，取液相，得到去除纖維蛋白的血漿，于4℃低溫或-20℃冷凍保存；三、向步驟一配置的緩沖液中加入低分子肝素鈉，混勻，加入羥乙基淀粉，混勻，加入聚乙二醇，混勻后，4℃預冷，得到保護劑，保護劑中低分子肝素鈉終濃度為14-16mol/mL；羥乙基淀粉終濃度為9-11mol/mL，聚乙二醇的體積濃度為2-3％；四、向步驟三配制的保護劑中加入去除纖維蛋白的血漿，去除纖維蛋白的血漿和保護劑的體積比為1：4，即得到用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑。

2.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟一中稱取氯化鈉3.12g、氯化鉀0.15g、氯化鎂0.11g、醋酸鈉1.025g、枸櫞酸鈉0.254g、葡萄糖酸鈣0.322g和海藻糖0.25g。

3.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟一中將氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、枸櫞酸鈉依次溶于500mL去離子水中。

4.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟一中加入葡萄糖酸鈣和海藻糖，攪拌至溶解，靜止10min，加入醋酸鈉，攪拌均勻，靜止5min。

5.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟一中采用質量濃度為1％的氫氧化鈉或質量濃度為1％的鹽酸調節pH值至7.0-7.2。

6.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟二中血漿和氯化鈣溶液的比例為1:8。

7.根據權利要求1或6所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于步驟二中氯化鈣溶液的質量濃度為1％。

8.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于保護劑中低分子肝素鈉終濃度為15mol/mL；羥乙基淀粉終濃度為10mol/mL。

9.根據權利要求1所述的一種用于冷凍的臍帶血造血干細胞復蘇后保護劑的配制方法，其特征在于保護劑中聚乙二醇的體積濃度為2.5％。