[發明專利]水稻雜交種的生產方法

有效

• 申請號: 201910316052.2
• 申請日: 2019-04-19
• 公開（公告）號: CN110268973B
• 公開（公告）日: 2022-05-20
• 發明（設計）人: 宋書鋒;李莉;王天抗;李懿星;邱牡丹;許娜
• 申請（專利權）人: 湖南雜交水稻研究中心
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;C12N15/62;C12N15/65;C12N15/82
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 史霞

1.一種水稻雜交種的生產方法，其特征在于，包括：

步驟一、將線粒體信號肽的堿基序列、WA352基因序列和外源報告基因共同整合到野生型水稻染色體上，得到含有線粒體信號肽的堿基序列、WA352基因序列和外源報告基因的轉基因不育株系，其中，所述WA352基因序列如SEQ ID NO:1所示，所述線粒體信號肽的堿基序列和WA352基因序列由絨氈層特異表達啟動子pUTD1序列調控，pUTD1啟動子序列的堿基序列如SEQ ID NO:3所示，所述線粒體信號肽的堿基序列、WA352基因序列和外源報告基因連鎖表達，如SEQ ID NO:7所示的堿基序列包含所述線粒體信號肽的堿基序列、WA352基因序列和外源報告基因的堿基序列，且兩端分別有BglII和XhoI酶切位點；

步驟二、將所述轉基因不育株系作為母本，以恢復系作為父本，進行雜交，獲得F1代種子，帶有所述外源報告基因的F1代種子為不育種子，剩余F1代種子為正常雜交水稻種子，以生產雜交水稻。

2.如權利要求1所述的水稻雜交種的生產方法，其特征在于，所述線粒體信號肽的堿基序列如SEQ ID NO:2所示。

3.如權利要求1所述的水稻雜交種的生產方法，其特征在于，所述外源報告基因由糊粉層特異啟動子Ltp2調控表達，所述啟動子Ltp2的堿基序列如SEQ ID NO:4所示。

4.如權利要求1所述的水稻雜交種的生產方法，其特征在于，步驟一中，將如SEQ IDNO:7所示的堿基序列構建到pCAMBIA1300載體上，得到pCAMBIA1300-WA352表達載體，然后將pCAMBIA1300-WA352表達載體通過農桿菌介導方法侵染水稻愈傷組織轉化入野生型水稻的染色體上，以將線粒體信號肽的堿基序列、WA352基因序列和外源報告基因共同整合到野生型水稻染色體上。

5.如權利要求1所述的水稻雜交種的生產方法，其特征在于，所述恢復系為發育正常的水稻常規品種，為水稻9311、華占或R900。

6.如權利要求1所述水稻雜交種的生產方法，其特征在于，所述外源報告基因為紅色熒光標記基因。

7.如權利要求6所述的水稻雜交種的生產方法，其特征在于，通過PCR方法轉基因T0代植株，PCR方法中采用的引物對如SEQ ID NO:5和6所示。