[發明專利]一種循環腫瘤細胞捕獲裝置及方法

在審

• 申請號: 201910313986.0
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN109991418A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 張鴻雁;賈敏;毛藝霏;逄淑雪
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

1.一種用于循環腫瘤細胞檢測的捕獲探針，其特征在于，所述捕獲探針置于樣本中能夠特異性吸附樣本中的腫瘤細胞，所述捕獲探針表面具有特異性識別腫瘤細胞表面抗原EpCAM及EGFR的抗體。

2.如權利要求1所述的捕獲探針，其特征在于，所述捕獲探針為表面覆蓋特異性識別抗體的留置針。

3.如權利要求1所述的捕獲探針，其特征在于，捕獲探針表面包覆可吸附蛋白材料，所述可吸附蛋白材料表面包覆所述特異性識別腫瘤細胞表面抗原EpCAM及EGFR的抗體；優選的，所述可吸附蛋白材料為聚二甲基硅氧烷。

4.權利要求1-3任一項所述腫瘤細胞捕獲探針的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：在留置針表面制備可吸附蛋白層獲得功能化留置針，將功能化留置針分別置于一定濃度的EpCAM及EGFR抗體溶液中得到所述腫瘤細胞捕獲探針。

5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述可吸附蛋白層為聚二甲基硅氧烷，所述聚二甲基硅氧烷的制備方法如下：按比例稱取預聚物和固化劑后混合連續攪拌一段時間獲取膠狀物，將膠狀物減壓干燥排盡其中的氣泡后保持真空一段時間；將留置針蘸取真空后的膠狀物并在一定溫度下干燥。

6.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述預聚物為SYLGUARD-184A；和所述固化劑為SYLGUARD-184B；所述預聚物和固化劑的比例為9～11:0.5～1.5；和/或所述膠狀物在真空狀態下干燥0.5-1h。

7.如權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述特異性識別抗體EpCAM及EGFR濃度分別為50～100μg/mL、50～100μg/mL；優選的，所述EpCAM及EGFR的比例為4～6：3～5；優選的，所述功能化的留置針置于EpCAM及EGFR抗體溶液中，4℃孵育過夜制備所述捕獲探針。

8.一種腫瘤細胞的捕獲方法，其特征在于，所述方法包括采用權利要求1-3任一項所述的捕獲探針放置于樣品中一段時間捕捉樣品中的腫瘤細胞，取出捕獲探針后用洗脫液將腫瘤細胞洗脫并收集。

9.一種非診斷治療目的的腫瘤細胞檢測方法，其特征在于，所述檢測方法采用權利要求8所述腫瘤細胞捕獲方法將樣本中的腫瘤細胞收集后，通過免疫細胞化學法、流式細胞術法、PCR方法及熒光檢測方法對收集的腫瘤細胞數量進行檢測；優選的，收集到的腫瘤細胞經DAPI染色后檢測。

10.一種腫瘤細胞檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括權利要求1-3任一項所述的腫瘤細胞捕獲探針；優選的，所述腫瘤細胞檢測試劑盒中還包括洗脫液、酶標板及檢測試劑；進一步優選的，所述檢測試劑包括固定液、透膜液及清洗液。