[發明專利]一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法

在審

• 申請號: 201910312879.6
• 申請日: 2019-04-18
• 公開（公告）號: CN110143997A
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發明（設計）人: 周劍;陳亞
• 申請（專利權）人: 湖州澤溪源生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 裴金華

1.一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于，包括以下步驟：

制備疊氮基寡核苷酸和DBCO-肽并高度純化；

反應準備：將DBCO-肽溶解在DMSO中得到DBCO-肽溶液，將疊氮基寡核苷酸溶于水或水與DMSO的混合液中得到疊氮基寡核苷酸溶液；

偶聯反應：（c1）、對疊氮基寡核苷酸進行高效液相色譜分析，其起始峰的面積為A₀，取DBCO-肽溶液的量為V₀添加到疊氮基寡核苷酸溶液中反應得到反應產物，其中DBCO-肽與疊氮基寡核苷酸的摩爾比為1:1.00-1.25；（c2）、確定綴合物峰的位置：對反應產物提取樣品并進行高效液相色譜分析，確定偶聯反應之后反應產物的峰的位置，未反應的疊氮基寡核苷酸的峰的面積為A₁；（c3）、逐步疊加反應：（1）第一次疊加反應：往反應產物中添加DBCO-肽溶液的量為V₁，；（2）第二次疊加反應：繼續添加DBCO-肽溶液的量為V₂，；（3）第n次疊加反應：繼續添加DBCO-肽溶液的量為V_n，，其中，每次疊加反應后，對產物提取樣品并進行高效液相色譜分析，得到未反應的疊氮基寡核苷酸的峰的面積A_n+1，直至A_n+1不再減小，結束疊加反應得到最終產物。

2.根據權利要求1所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：所述DBCO-肽溶液的濃度在1-10mM，所述疊氮基寡核苷酸溶液的濃度在0.1-1.0mM。

3.根據權利要求1所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：所述高效液相色譜使用紫外檢測器。

4.根據權利要求3所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：所述紫外檢測器檢測波長設置為210nm。

5.根據權利要求1所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：在步驟e之后，對最終產物進行真空冷凍干燥即可直接用于下一步實驗。

6.根據權利要求1所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：在步驟b中，將疊氮基寡核苷酸溶于水或水與DMSO的混合液中得到濃度在0.1mM-100mM的疊氮基寡核苷酸溶液，其中水與DMSO混合液中，水與DMSO的混合體積比為1:1-5。

7.根據權利要求6所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：水與DMSO混合液中，水與DMSO的混合體積比為1:1。

8.據權利要求1所述的一種可擴展的合成寡核苷酸肽綴合物的操作方法，其特征在于：步驟（c1）中DBCO-肽與疊氮基寡核苷酸的摩爾比為1:1。