[發明專利]一種超敏化學發光HRP底物液及其制備方法

在審

• 申請號: 201910310906.6
• 申請日: 2019-04-17
• 公開（公告）號: CN110031615A
• 公開（公告）日: 2019-07-19
• 發明（設計）人: 王靜;丁文鵬;陳曦;韓加如
• 申請（專利權）人: 江蘇食品藥品職業技術學院
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52;G01N21/76;G01N33/68
• 代理公司: 北京彭麗芳知識產權代理有限公司 11407
• 代理人: 彭麗芳

本發明公開了一種超敏化學發光HRP底物液，該底物液由A液和B液等體積復配而成，所述A液為1000mL,pH＝9.0，其中，含有Tris 24.23g；吩噻嗪?10?基?丙基磺酸鈉鹽2.060g；4?二甲氨基吡啶0.37g；魯米諾0.44g；1mol/L的NaOH溶液1mL；余量為鹽酸和純水；所述B液為1000mL,pH＝3.5～5.0，其中，含有過氧尿素1.175g；冰乙酸2.875mL；余量為純水與5mol/L的NaoH溶液。本發明采用目前國際最先進的增敏技術，二次增敏，使得底物液靈敏度高，高于國外Thermo Pierce廠家同類產品，發光平穩，背景更低,可達到pg級，大大節省了抗體與樣品的用量，特別適用于檢測低豐度的蛋白質含量。

技術領域

本發明涉及超敏化學發光技術領域，具體涉及一種超敏化學發光HRP底物液及其制備方法。

背景技術

化學發光技術是免疫診斷技術中的一種，而免疫診斷技術的差別，大體上在抗原抗體包被和信號檢測這兩個環節，目前市面上化學發光HRP底物液無論應用于科研中或是應用于醫學免疫診斷，大部分都依賴于進口，且價格昂貴，而國產的大部分發光液靈敏度不高，發光不穩定或是對Western blot實驗操作的聚乙烯纖維膜存在損傷性。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供了一種超敏化學發光HRP底物液及其制備方法，采用目前國際最先進的增敏技術，二次增敏，使得底物液靈敏度高，發光平穩，背景更低,可達到pg級。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：

一種超敏化學發光HRP底物液，所述A液由Tris、吩噻嗪-10-基-丙基磺酸鈉鹽、4-二甲氨基吡啶、魯米諾、NaOH溶液、純水、鹽酸復配而成；所述B液由過氧尿素、冰乙酸、純水、NaoH溶液復配而成。所述A液為1000mL,pH＝9.0，其中，含有Tris 24.23g；吩噻嗪-10-基-丙基磺酸鈉鹽2.060g；4-二甲氨基吡啶0.37g；魯米諾0.44g；1mol/L的NaOH溶液1mL；余量為鹽酸和純水；

所述B液為1000mL,pH＝3.5～5.0，其中，含有過氧尿素1.175g；冰乙酸2.875mL；余量為5mol/L的NaoH溶液和純水。

本發明還提供了上述一種超敏化學發光HRP底物液的制備方法，包括如下步驟：

S1、A液的配置

S11、配置Tris緩沖液：稱取24.23g Tris加900mL超純水溶解，得Tris緩沖液；

S12、稱取吩噻嗪-10-基-丙基磺酸鈉鹽2.060g，加入到所得的Tris緩沖液中，攪拌至溶解；

S13、稱取4-嗎啉基吡啶0.37g，加入到上述的Tris緩沖液中，攪拌至溶解；

S14、稱取魯米諾0.44g，加入1mL 1mol/L的NaOH溶液，充分溶解后，再加入到緩沖液中，攪拌至溶解；

S15、向所得的緩沖液中加入適量鹽酸調pH至9.0，定容為1000mL，配置完后避光保存；

S2、B液配置方法

S21、取2.875mL冰乙酸加入到950mL超純水中，用5mol/L的NaOH溶液調pH至3.5～5.0；

S22、稱取過氧尿素1.175g加入到上述液體中，攪拌至溶解，定容為1000mL，得B液；

S3、將A液與B液等體積混合后，即得，現用現配。

本發明具有以下有益效果：