[發明專利]一種小肽及其應用

有效

• 申請號: 201910308920.2
• 申請日: 2019-04-17
• 公開（公告）號: CN110066324B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 張振華;羅勁松;宋海星;楊勇
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C12N15/81;C12N15/82;C12N15/70;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 魏龍霞

1.一種小肽在提高酵母鎘抗性中的應用，所述小肽由基因AtPDF2.5密碼子編碼的氨基酸通過肽鏈連接得到，所述基因AtPDF2.5的基因序列如SEQ ID NO：1所示，其特征在于，所述應用的操作方法包括如下步驟：將所述小肽的編碼基因AtPDF2.5通過PCR法擴增，然后通過同源重組的方法克隆至酵母表達載體PYES2中，得到含有基因AtPDF2.5的目標載體，再通過PEG/醋酸鋰法把所述目標載體轉化至酵母的鎘敏感突變體?yap1中進行異源過表達，即得到含有所述小肽的鎘耐受酵母。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述PCR法擴增采用的引物為Ye-AtPDF2.5，其正向引物如SEQ ID NO：3所示，其反向引物如SEQ ID NO：4所示。

3.一種小肽在提高植物鎘抗性和鎘積累中的應用，所述小肽由基因AtPDF2.5密碼子編碼的氨基酸通過肽鏈連接得到，所述基因AtPDF2.5的基因序列如SEQ ID NO：1所示，其特征在于，所述應用的操作方法包括如下步驟：將所述小肽的編碼基因AtPDF2.5通過PCR法擴增，然后通過同源重組的方法克隆至植物表達載體P1300中，得到含有基因AtPDF2.5的目標載體，再將所述目標載體通過熱擊轉化法轉入農桿菌中，最終通過花序浸染法轉化到植物中進行過表達，即得到含有所述小肽的鎘耐受植物。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述PCR法擴增采用的引物為OE-AtPDF2.5，其正向引物如SEQ ID NO：7所示，其反向引物如SEQ ID NO：8所示。

5.一種小肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示的第27至73位。

6.一種如權利要求5所述的小肽在提高大腸桿菌鎘螯合活性中的應用，其特征在于，所述應用的操作方法包括如下步驟：將所述小肽的編碼基因ΔSPAtPDF2.5通過PCR法擴增，所述編碼基因ΔSPAtPDF2.5的基因序列如SEQ ID NO：1的第79位至第222位所示，然后通過同源重組的方法克隆至蛋白表達載體PCold-TF中，得到含有基因ΔSPAtPDF2.5的目標載體，再將所述目標載體通過熱擊轉化法轉入大腸桿菌中進行原核表達，即得到具有鎘螯合活性的原核表達蛋白。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述PCR法擴增采用的引物為TF-AtPDF2.5，其正向引物如SEQ ID NO：5所示，其反向引物如SEQ ID NO：6所示。