[發明專利]一種抗人NT-proBNP多肽的單克隆抗體

在審

• 申請號: 201910307614.7
• 申請日: 2019-04-17
• 公開（公告）號: CN109942707A
• 公開（公告）日: 2019-06-28
• 發明（設計）人: 閆金勇;詹雷雷;駱錕
• 申請（專利權）人: 蘄泰和瑞生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: C07K16/26
• 分類號: C07K16/26
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明公開了一種抗人NT?proBNP多肽的單克隆抗體，包括選擇NT?proBNP抗原決定簇多肽片段aa1和aa2、制備NT?proBNP抗原決定簇多肽片段aa1與aa2、形成偶聯蛋白aa1?KLH?aa2、用偶聯蛋白aa1?KLH?aa2作為抗原免疫動物制備所述抗人NT?proBNP多肽的單克隆抗體等步驟。本發明的生產過程所制備的偶聯蛋白具有良好的蛋白表面活性和抗原性,便于篩選出特異性良好的單克隆抗體，本發明中的偶聯蛋白能增加抗原決定簇的數量，從而增加單克隆抗體產生的種類，并提高后期單克隆抗體配對的可能性，本發明的制備過程簡單、抗體親和力高。本發明具有廣闊的市場前景。

技術領域

本發明涉及抗體工程技術領域，具體涉及一種抗人NT-proBNP多肽的單克隆抗體。

背景技術

隨著生活條件和醫療條件的提高，社會老齡化現象越來越顯著，心力衰竭病人數逐年增加。心力衰竭(Heart Failure)是一種因心臟功能障礙而產生的體征與癥狀的臨床綜合征。雖然一些藥物可延緩病情惡化，但除非進行心臟移植，否則心力衰竭是無法治愈的。心力衰竭早期診斷是當今醫療保健面臨的最關鍵問題，越早開始治療，對病人就越有利。然而，心力衰竭(尤其是在心衰早期)難于確診的。心力衰竭的典型癥狀，如疲勞、呼吸急促、踝關節腫脹等都不具特異性，有些病情輕微的患者也沒有表現出典型癥狀。初級醫療機構僅依賴臨床標準作為診斷依據，診斷心力衰竭的假陽性率可高達50％。目前診斷心衰最常用有效的方法主要有超聲心動圖、放射核素顯像和心核磁共振檢查；但是日常實際診斷左心室功能衰竭時，上述檢查手段沒有一項是可以完全信賴，并具有良好的重現性的。因此，臨床上急需一種客觀、簡單、科學的快速診斷方法，提高心衰患者的診斷率。研究表明腦鈉肽(Brain natriuretic peptide，BNP)和氨基末端腦鈉肽前體(N-terminal pro-brainnatriuretic peptide，NT-proBNP)濃度的升高對于心力衰竭的診斷具有非常高的敏感性，并能評估心功能損害程度，是診斷心力衰竭非常有效的生物標記物。

BNP是一種多肽類激素，主要由心室分泌，具有利鈉、擴張血管、抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統的作用。研究顯示，這類物質對于慢性心力衰竭及心臟功能不全的診斷具有良好的指導意義。BNP是由前腦鈉肽元(preproBNP)通過蛋白酶解的方式形成的。preproBNP是在心肌細胞中合成的的多肽鏈，包含134個氨基酸殘基，當1-26位信號肽被切掉后就形成包含108個氨基酸殘基的腦鈉肽(proBNP)。pro-BNP在心室受刺激時，裂解成有活性的BNP(32個氨基酸)和沒有活性的NT-proBNP(76個氨基酸)。NT-proBNP和BNP等比例釋放，二者在心血管系統疾病的診斷、治療、監測和預后方面有著相似的臨床應用。

NT-proBNP的生物半衰期是60-120分鐘，相比BNP 20分鐘的生物半衰期要長數倍，而且心力衰竭時NT-proBNP的升高幅度顯著大于BNP，因而更利于檢測。此外，NT-proBNP在血清和血漿中非常穩定，無需對樣品進行預處理，可以采用常規血液樣本的傳送和處理方法。正常情況下，NT-proBNP含量幾乎沒有日間變異，因而可以隨時取樣檢測；而且還不受患者體位及運動狀況的影響。血漿NT-proBNP水平隨心衰程度加重而升高。50歲以下的成人血漿NT-proBNP濃度450 pg/mL，診斷急性心衰的敏感性和特異性分別為93％和95％；50歲以上的人血漿濃度900 pg/mL，診斷心衰的敏感性和特異性分別為91％和80％。

通過與紐約心臟學會(New York heart association，NYHA)心功能分級比較，NT-proBNP更能真實反映心功能的變化。NT-proBNP水平與心力衰竭的嚴重程度相關，水平越高病變越嚴重，預后也越差。同時，NT-proBNP有利于在早期階段或病變輕微階段發現心衰。

隨著心力衰竭病例的日益增多，開展和加強NT-proBNP檢測對于診斷和防治心力衰竭，有很重要的意義。對于NT-proBNP的鑒定已經進行過相關研究及報道，WO93/24531