[發明專利]一種革蘭氏染色法

在審

• 申請號: 201910297906.7
• 申請日: 2019-04-15
• 公開（公告）號: CN110016492A
• 公開（公告）日: 2019-07-16
• 發明（設計）人: 楊麗英;周婷婷;李雨艷;岳志敏;齊春林
• 申請（專利權）人: 吉林金域醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 劉微

本發明公開了一種革蘭氏染色法，屬于微生物檢測技術領域，解決現有技術存在細菌感染人的風險、固定受力不均等問題。本發明提供的革蘭氏染色法，包括涂片、固定和染色的步驟，在涂片后直接采用紫外照射法進行固定，再進行染色，讓細菌菌體充分暴露在紫外線下，殺死菌體同時，涂片進行了固定，不僅降低了細菌感染人的風險，而且菌體固定受力一致，不會因常規加熱固定步驟受熱不均造成菌體變形，影響實驗人員對結果的判斷。采用本發明方法染片結果更穩定，對結果判斷更有力，為指導臨床感染性疾病診斷和治療的提供可靠依據。

技術領域

本發明涉及微生物檢測技術領域，尤其涉及一種革蘭氏染色法。

背景技術

革蘭氏染色法是細菌學(Gramstain)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭(Hans Christian Gram，1853年-1938年)于1884年所發明，最初是用來鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關系。100多年來一直使用著Gram氏發明的四步法,是各細菌實驗經常使用而不可缺少的細菌檢驗技術之一。其檢驗原理是通過結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭陽性菌由于細胞壁厚，肽聚糖網層次多且交聯致密、不含類脂，故與乙醇脫色處理時網孔縮小，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、肽聚糖層較薄且交聯度差、外膜層類脂含量高,乙醇處理時以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出,因此通過乙醇脫色后仍呈無色,再經沙黃等紅色染料復染，使其革蘭陰性菌呈紅色。未經染色之細菌，由于其與周圍環境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀察。染色后細菌與環境形成鮮明對比，可以清楚地觀察到細菌的形態、排列及某些結構特征，而用以分類鑒定。

革蘭氏染色屬復染法，操作流程包括涂片、晾干、標本固定、龍膽紫染色、水洗、加碘液媒染、酒精脫色、蕃紅復染等步驟。其中，現有的染色方法采用自然干燥和火焰2-3次固定，如《全國臨床檢驗操作規程》(第4版)第568頁第二章病原生物學檢驗技術中第一節的描述。然而，這種操作方法對于操作者和操作環境均具有一定的感染風險，此外，采用火焰加熱固定，菌體受熱不均容易造成菌體變形，影響操作人員對實驗結果的判斷。

發明內容

本發明針對上述技術問題，提供一種新的革蘭氏染色法，菌體固定受力一致，同時降低操作人員的感染風險。

為了實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明提供的一種革蘭氏染色法，包括涂片、固定和染色的步驟，本發明方法在涂片后直接采用紫外照射法進行固定，再進行染色。

優選的實施方案中，上述的革蘭氏染色法，紫外照射時間為20-40分鐘。

更優選地，上述的革蘭氏染色法，紫外照射時間為30分鐘。

優選的實施方案中，上述的革蘭氏染色法，紫外線照射操作在生物安全柜中進行。

在其中一個實施方案中，所述革蘭氏染色法針對的染色對象選自革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陰性球菌、革蘭氏陽性桿菌、革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽性孢子中的一種或多種。

具體地，所述染色對象選自金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、白假絲酵母菌中的一種或多種。

更具體地，所述染色對象為白假絲酵母菌。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：