[發(fā)明專利]一種細胞凍存液

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910296834.4
• 申請日: 2019-04-15
• 公開（公告）號: CN110150264A
• 公開（公告）日: 2019-08-23
• 發(fā)明（設計）人: 龔立康;劉天歌;王卿
• 申請（專利權）人: 南京愷德生物科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明一種細胞凍存液，含有基礎培養(yǎng)基、甘油、胎牛血清和非滲透性的保護劑，各組分的含量為：甘油11?15v/v％、胎牛血清0.5?1v/v％、非滲透性的保護劑0.11～0.15w/v％，余量為基礎培養(yǎng)基；所述基礎培養(yǎng)基為RPMI?1640、MEM、高糖DMEM、低糖DMEM或DMEM?F12。本發(fā)明不含二甲基亞砜，而是通過非滲透性保護劑與甘油和胎牛血清的不同搭配來獲取好的冷凍效果，具有很強的水分子絡合能力，在冷凍功能上與二甲基亞砜相似，但能減少冷凍過程中細胞內冰晶的形成；作為細胞凍存液，添加成份明確、安全性高、對細胞損傷小、細胞凍存前后形態(tài)一致、細胞復蘇后細胞存活率高、增殖能力良好。

技術領域

本發(fā)明涉及細胞及生物工程學技術領域，具體的，是一種細胞凍存液。

背景技術

細胞凍存是生物研究中的重要環(huán)節(jié)之一，它對人工培養(yǎng)細胞的凍存、防止由于細胞傳代培養(yǎng)所導致的細胞退化、防止傳代培養(yǎng)中的細菌污染、解決維持傳代培養(yǎng)過程中的一系列問題具有重要作用。然而，細胞凍存也會在一定程度上使細胞受到損傷。

目前在細胞凍存領域中，人們廣泛采用的是冷凍劑(英語全稱Cryo-ProtectantAgent，簡稱CPA)。所述冷凍劑包括滲透型冷凍劑和非滲透型冷凍劑，其中，滲透型冷凍劑主要包括二甲基亞砜、甘油、乙二醇、丙二醇、乙酰胺和甲醇；其的保護機理是：在細胞冷凍懸浮液完全凝固之前，冷凍劑能進入細胞內，在細胞內外形成一定的摩爾濃度，降低細胞內外尚未結冰的溶液中的電解質濃度，以保護細胞免受高濃度電解質的損傷，同時，能使細胞內水分不會過多外滲，能避免細胞過度脫水而皺縮。所述冷凍劑能有效降低細胞凍存過程中細胞的溶質損傷和冰晶損傷。目前采用的冷凍劑中，二甲基亞砜(DMSO)是細胞保存中最常用的冷凍劑，但是，它同時對細胞也存在一定的毒性，常溫下能使細胞內蛋白變性，因此，這些不足限制了它的進一步應用。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足并在現(xiàn)有研究成果的基礎上，提供一種細胞凍存液，它不含二甲基亞砜，而是通過海藻酸鈉、透明質酸、γ-聚谷氨酸這些非滲透性的保護劑與甘油和胎牛血清的不同搭配來獲取較好的冷凍效果，可用于細胞的低溫凍存，具有細胞凍存前后形態(tài)一致、細胞復蘇后存活率高、增殖能力良好的積極效果。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了以下技術方案。一種細胞凍存液，其特征在于，含有基礎培養(yǎng)基、甘油、胎牛血清和非滲透性的保 護劑，其各組分的含量為：

甘油11-15v/v％；

胎牛血清0.5-1v/v％；

非滲透性的保護劑0.11～ 0.15w/v％；

余量為基礎培養(yǎng)基。

進一步，所述基礎培養(yǎng)基為RPMI-1640、MEM、高糖DMEM、低糖DMEM或DMEM-F12。

進一步，所述非滲透性的保護劑為海藻酸鈉(Sodium alginate)、透明質酸鈉(Hyaluronic acid sodium salt)或γ-聚谷氨酸(γ-polyglutamic acid)。

本發(fā)明細胞凍存液的積極效果為：

(1)不含二甲基亞砜，而是通過非滲透性的保護劑-海藻酸鈉、透明質酸鈉、γ- 聚谷氨酸與甘油和胎牛血清的不同搭配來獲取較好的冷凍效果，具有很強的水分子絡合能力，在冷凍功能上與二甲基亞砜相似，但能減少冷凍過程中細胞內冰晶的形成，可用于細胞 的低溫凍存。

(2)作為細胞凍存液，具有細胞凍存前后形態(tài)一致、細胞復蘇后存活率高、凍存復蘇后細胞的增殖能力良好的積極效果。

(3)添加成份明確，安全性高，對細胞的損傷小；可用于替代目前最常用的二甲基亞砜冷凍液。

具體實施方式