[發明專利]一種腺苷脫氨酶測定試劑盒

在審

• 申請號: 201910295591.2
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109988816A
• 公開（公告）日: 2019-07-09
• 發明（設計）人: 陳青松;林耀文;李傳清
• 申請（專利權）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/48
• 分類號: C12Q1/48;C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

本發明屬于醫學及生物化學技術領域，具體涉及一種腺苷脫氨酶檢測試劑盒。該試劑盒包括試劑R1和試劑R2；試劑R1包括：嘌呤核苷磷酸化酶、黃嘌呤氧化酶、過氧化物酶、防腐劑、4?氨基安替比林和緩沖液；試劑R2包括：腺苷、顯色劑、防腐劑和緩沖液。該腺苷脫氨酶檢測劑盒采用連續監測法來進行測定，主波長為550nm，具有靈敏高、準確性好等優點。

技術領域

本發明涉及醫學及生物化學技術領域，具體涉及一種腺苷脫氨酶測定試劑盒。

背景技術

腺苷脫氨酶(adenosine deaminase，ADA)是嘌呤核苷代謝中重要的酶類，是一種與機體細胞免疫活性有重要關系的核酸代謝酶。其活性是反映肝損傷的敏感指標，可作為肝功能常規檢查項目之一。血清中的ADA活性測定可用于：判斷急性肝損傷及殘留病變；協助診斷慢性肝??；有助于肝纖維的診斷；有助于黃疸的鑒別。此外，ADA缺乏與重癥聯合免疫缺陷病(SCID)有關，可作為核酸代謝重要的酶類；ADA缺乏可導致核酸代謝障礙，影響到胸腺的發育，從而引起免疫功能缺陷。腦脊液ADA檢測可作為中樞神經系統疾病診斷和鑒別診斷的重要指標。ADA在良惡性難辨的滲出液鑒別診斷上也具有重要價值。因此，測定血液、體液中的ADA及其同工酶水平對這些疾病的鑒別、診斷、治療及免疫功能的研究日趨受到臨床重視。

近十幾年來，隨著對ADA的深入研究，檢測方法也不斷發展。目前比色法已發展了五代。第一代ADA測試：ADA將腺苷(Adenosine)脫氨產生次黃苷(Inosine)和氨(NH₃)。通過動態測量腺苷265nm處吸光度下降的速度，測算ADA的活性大小。但是該法高底物濃度造成吸光度過高，僅適用于腺苷濃度低于40.00μmol/L。如此低的底物濃度達不到底物飽和要求，造成ADA活性檢測失真。因此，該法不適用于臨床應用。

第二代ADA測試：原理為腺苷脫氨酶催化腺嘌呤核苷水解，產生次黃嘌呤核苷和氨。然后用Berthelot顯色反應測定反應過程中產生氨的量，從而計算血清ADA活性單位。該法所需試劑易配制，儀器簡單，但靈敏度低，易受外源性NH₃影響，空白過高，不能直接測定紅細胞ADA活性?；谕瑯拥脑?，ADA偶聯谷氨酸脫氫酶(Glutamate Dehydrogenase，GLDH)反應，通過測量340nm波長下NADPH(nicotinamide adenine dinucleotidephosphate reduced form，還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷磷酸，還原型輔酶II)吸光度下降的速度來計算ADA活性。該法也因血清含氨干擾，以及測試系統中過高的NADPH造成非特異性氧化，而不能準確計算ADA活性。

第三代ADA測試：通過ADA偶聯嘌呤核苷磷酸化酶(Purinenucleosidephosphorylase，PNP)和黃嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)反應連續監測法。通過測量293nm處尿酸鹽吸光度上升的速度來測算ADA活性。但是，293nm時血清吸光度太高，造成臨床應用不便。

第四代ADA測試：通過ADA偶聯PNP，XOD，過氧化氫酶(Catalase)和醛脫氫酶(Aldehyde dehydrogenase)，借助過氧化氫(H₂O₂)反應測量334nm處NADPH吸光度上升的速率來測算ADA活性。該法克服了以往ADA測試的困難，但是，該法劑成本高，阻礙實際臨床使用。