[發明專利]一種超高速擴增型Taq DNA聚合酶

有效

• 申請號: 201910294840.6
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN109943549B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 張惠丹;戴敬
• 申請（專利權）人: 蘇州譯酶生物科技有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/686;C12R1/19
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹;王鋒

本發明提供了一種超高速擴增型Taq DNA聚合酶，其包含與SEQ ID No:1至少90％相同的氨基酸序列。該超高速擴增型Taq DNA聚合酶當擴增片段低于1kb,其延伸速度最快可達到1s/kb,其擴增延伸速率高于市場上普通的Taq DNA聚合酶，因此可以大大節約PCR的擴增時間。利用本發明建立的制備方法可以得到高純度Taq DNA聚合酶。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，具體而言，涉及一種超高速擴增型Taq DNA聚合酶及其應用。

背景技術

脫氧核糖核苷酸為絕大多數生物的重要遺傳物質。DNA聚合酶是一種具有DNA結合和復制能力的熱穩定性蛋白，其主要功能是進行DNA的半保留復制和修復。目前現有技術中已經成功克隆表達了多種生物物種的DNA聚合酶，Taq DNA聚合酶1976年科學家A.Chien從水生嗜熱菌(Thermus aquaticus)中分離出來的一種耐熱的DNA聚合酶(Chien A，EdgarDB,Trela JM.Deoxyribonucleic acid polymerase from the extreme thermophileThermus aquaticus.[J].Bacteriol,1976,127(3):1550-1557.)。1983年kary Mullis發明了PCR(polymerase chain reaction)，1988年Randall K.Saiki等首次將Taq DNA聚合酶應用于PCR技術，使得PCR過程實現了自動連續循環。

現有技術中Taq DNA聚合酶是一種耐熱的DNA聚合酶，屬于DNA聚合酶I類，酶基因全長2496個堿基，編碼832個氨基酸，分子量為94kD。在70℃～75℃時具有最高的生物學活性，在92.5℃酶活性可持續130min，95℃持續40min，97.5℃持續5-6min可保持約50％的酶活性。一般的最適反應溫度為75℃，引物在50℃～60℃退火，72℃延伸，可防止引物與模板間的錯配及DNA二級結構的形成，從而提高了擴增特異性，且有利于擴增較長的片段，70℃時延伸速率在60核苷酸/秒以上。

PCR技術目前廣泛應用于生物學、農學和醫學等領域，DNA聚合酶的研究和發展也是PCR反應能迅速發展和廣泛應用的主要原因，也成為目前分子生物學和基因工程中必不可少的工具酶。隨著基因產業的發展，后基因時代(基因的應用時代)將進行深層次的產業變革，人們將設計和創造許多重要的新生物分子，廣泛用于制藥、農業、食品、化工、化妝品、環境、能源等領域。PCR技術作為基因研究和編輯的主要手段，對于新性能、高活性、低成本的DNA聚合酶的研究，對于人類的進步和發展都有重大意義。本發明因此而來。

發明內容

本發明旨在提供一種超高速擴增型Taq DNA聚合酶，以解決現有技術中的問題。

為了實現上述目的，根據本發明的一個方面，提供了一種超高速擴增型Taq DNA聚合酶，其特征在于包含與SEQ ID No:1至少90％相同的氨基酸序列。

本發明的另一目的在于提供一種重組核酸，其特征在于所述重組核酸編碼所述的DNA聚合酶。

優選的技術方案是所述重組核酸的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。

本發明的又一目的在于提供一種表達載體，其特征在于包含所述的重組核酸。

本發明的又一目的在于提供一種宿主細胞，其特征在于包含所述的表達載體。

本發明的又一目的在于提供一種制備DNA聚合酶的方法，其特征在于所述方法包括：在適合于表達編碼DNA聚合酶的核酸的條件下培養所述的宿主細胞。

本發明的又一目的在于提供一種進行引物延伸的方法，其特征在于包括：在適合于引物延伸的條件下，使所述的DNA聚合酶與引物、核苷酸鏈模板和核苷三磷酸接觸，產生延伸的引物。