[發明專利]基于磁性分離和DNA自組裝的腫瘤外泌體納米熒光傳感器

有效

• 申請號: 201910294220.2
• 申請日: 2019-04-12
• 公開（公告）號: CN110095608B
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 鄭磊;李博;劉春辰;潘煒倫;司徒博;安泰學;張曄;張涵
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學南方醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574;G01N33/543;G01N33/58
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 周建軍

本發明提供一種基于磁性分離和DNA自組裝的腫瘤外泌體納米熒光傳感器，包括偶聯GPC?1抗體的功能化磁珠、觸發鏈、三個莖環狀核酸探針。本發明實現了乳腺癌GPC?1(+)外泌體亞群的定量檢測，檢測特異性高、靈敏度高、檢測范圍寬，通過對臨床血漿來源標本中的乳腺癌GPC?1(+)外泌體亞型進行檢測以評估該方法的臨床應用價值，該方法具有普適性，可運用于其它已篩出特異核酸適體的生物標志物。可用于其它外泌體亞型、蛋白、細胞和金屬離子等的檢測。

技術領域

本發明涉及腫瘤液體檢測技術領域，特別是涉及一種基于磁性分離和DNA自組裝的腫瘤外泌體納米熒光傳感器。

背景技術

乳腺癌是全球最常見的女性惡性腫瘤。2015年中國癌癥統計數據顯示：近十年，中國乳腺癌患者占所有女性癌癥患者的15％，且死亡率有明顯上升趨勢，是45歲以下女性最常見的癌癥死因。早期發現、早期診斷是改善乳腺癌患者預后、提高生存率的重要手段。目前乳腺癌早期篩查措施包括：乳腺X線、乳腺超聲、乳腺核磁共振、臨床體檢和自檢；診斷措施包括：細胞學檢查、病理活檢，正電子發射計算機斷層顯像(Pet-CT)。以上篩查或診斷措施不同程度存在靈敏度低、特異性差、有創、有放射性、檢查周期長等缺點，因此建立敏感、特異、無創、便捷、快速的替代檢測方法用于早期乳腺癌的篩查、診斷或監測，對控制乳腺癌發展和提高患者生存質量顯得尤為重要。

液體活檢有著迅速、便捷、損傷性小等眾多優點，在大幅度縮短癌癥確診時間的同時，可對癌癥患者的治療情況進行隨時監測，有望成為乳腺癌篩查、診斷或監測的理想方法。最新研究發現外泌體與乳腺癌的發生、發展、轉移以及抗藥性具有一定的相關性，被認為是具有廣泛應用前景的乳腺癌液體活檢生物標志物。

目前外泌體的實驗室檢測主要包括分離和分析兩大步驟。外泌體分離方法金標準是超速離心法，耗時長、需要昂貴的實驗設備、所需標本量大(＞2mL)等缺點限制了其臨床應用；已出現的商業化外泌體分離沉淀試劑盒耗時較短、所需標本量小，但分離純度有限，且試劑明顯影響外泌體的生物活性。而目前外泌體分析的主流方法：納米粒子跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)和電鏡僅可提供外泌體的大小、濃度、形態等參數，不能確定外泌體來源；其它如ELISA或Western blot檢測外泌體蛋白等方法，由于需要樣本量較大，操作步驟繁瑣，同樣不適用于臨床檢測。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種基于磁性分離和DNA自組裝的腫瘤外泌體納米熒光傳感器，用于解決現有技術中外泌體的檢測方法操作繁瑣、所需樣本量大、不適用于臨床檢測等問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種用于腫瘤外泌體檢測的試劑盒，包括偶聯有抗體的功能化磁珠、觸發鏈、三個莖環狀核酸探針。

可選地，所述觸發鏈包括用于與標志物互補結合的識別區、用于與所述三個莖環狀核酸探針互補結合的觸發區。

可選地，所述觸發區含有如下核苷酸序列：GCACTACTCCCTAACATCTCAAGC。

可選地，所述偶聯有抗體的功能化磁珠選自偶聯GPC-1抗體的功能化磁珠。

可選地，所述觸發鏈的識別區含有如下核苷酸序列： CACCCCACCTCGCTCCCGTGACACTAATGCTA。

可選地，所述偶聯GPC-1抗體的功能化磁珠可以從是市場上購買鏈霉親和素化磁珠和 GPC-1抗體，自行包被得到，針對不同的標志物，磁珠上可以偶聯不同的抗體。

可選地，所述觸發鏈選自CD63aptamer-ssDNA，所述CD63aptamer-ssDNA含有如SEQID NO.1所示的核苷酸序列。