[發明專利]一種基于信號增強型多聚體功能化金紅石相二氧化鈦介晶的玉米赤霉烯酮檢測方法

有效

• 申請號: 201910290765.6
• 申請日: 2019-04-11
• 公開（公告）號: CN109975375B
• 公開（公告）日: 2021-07-02
• 發明（設計）人: 戴宏;李佳寧;任卉竹;高利紅;張書培;衣歡;鄭祥欽;韓晴;宋建榕
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N27/416
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于信號增強型多聚體功能化金紅石相二氧化鈦介晶的玉米赤霉烯酮檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1） 玻碳電極GCE的預處理：玻碳電極首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；

（2） MPS-FF/Ab₁/ZEN修飾電極的制備：將5 mg的二苯基丙氨酸FF粉末溶于1 mL六氟異丙醇HFIP溶液，再將3 mg/mL介孔二氧化硅MPS溶液滴加到上述二苯基丙氨酸FF 溶液中，使二者的濃度比為4:1得到混合溶液，然后，取3μL混合溶液滴涂于干凈的玻碳電極表面，在烘箱中烘干，冷卻至室溫，將所獲得的修飾電極浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗體Ab₁水溶液， 在4°C下孵育50 min，隨后使用pH7.5的磷酸緩沖溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗體Ab_1，再將電極浸入濃度為1.0 wt.%的BSA 1 h，封閉電極表面上非特異性活性位點，沖去表面殘余液后，即得到MPS-FF/Ab₁修飾電極；將電極浸入5 μL不同濃度的玉米赤霉烯酮ZEN標準溶液中于冰箱中孵育40min；用pH 7.5的磷酸緩沖溶液沖洗電極表面并在室溫條件下自然晾干，得到MPS-FF/Ab₁/ZEN修飾電極;

（3）MPS-FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs修飾電極的制備： 將5mg金紅石型TiO₂介觀晶體TiO₂ MCs粉末用二次水分散均勻，得到濃度為5mg/mL的TiO₂ MCs懸浮液，并與0.013M的半胱胺溶液按照體積比為1:5的比例吸附30min，在5000rpm的轉速下離心20min，所得固體用pH 7.5的PBS分散，得到半胱胺功能化的金紅石型TiO₂介觀晶體rTiO₂ MCs；然后，將rTiO₂MCs與Envision多聚體按照體積比為5:1的比例混合并吸附3h，接著在6000rpm的轉速下離心20min，所得固體用pH 7.5的PBS分散，再加入20 μL BSA溶液，得到多聚體功能化金紅石相二氧化鈦介晶Envision@rTiO₂ MCs；最后將電極浸入5 μL Envision@rTiO₂ MCs溶液中，于4°C下孵育50min，用pH7.5的磷酸緩沖溶液洗去殘余液即得到MPS-FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs修飾電極；

（4）玉米赤霉烯酮的檢測：采用三電極體系進行測定，以MPS-FF/Ab₁/ZEN/Envision@rTiO₂ MCs修飾電極為工作電極，Ag/AgCl為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，利用光電化學工作站進行檢測，設置電壓為0.2V，每隔10s進行開關燈，氙燈發射的單色光激發光源使用前由單色儀過濾；在pH 7.5的 PBS緩沖溶液中，通過光電化學工作站進行檢測1×10^-7 ng/mL–10 ng/mL之間的一系列不同濃度的玉米赤霉烯酮標準溶液，通過記錄開關燈前后產生的不同電流信號，繪制工作曲線；待測樣品溶液代替玉米赤霉烯酮標準溶液進行檢測，檢測的結果通過工作曲線查得。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的介孔二氧化硅MPS由下述方法制備的：利用水熱合成的方法合成 SiO₂ 介孔材料，以原硅酸四乙酯TEOS作為硅的來源，三嵌段共聚物 P123和1-羧乙基-3-甲基咪唑硝酸鹽離子液體PIL作為結構模板單元；首先， 將4gP123 和2.67gPIL 完全溶解在二次水中，用 2M 的 HCl 控制溶液的pH，然后，在不斷攪拌的情況下，將 9gTEOS 緩慢加入到溶液中，40°C 溫度下攪拌 24h，得到膠狀物質；隨后，將其全部轉移到四氟化鈦不銹鋼高壓釜中在 120°C的溫度下老化 48h，過濾產物，用乙醇和二次水清洗，再在烘箱中干燥一夜；最后，將得到的固體粉末在室溫中煅燒 6h 去除模板，取3mg固體粉末溶于二次水中，配制成3 mg/mL介孔二氧化硅MPS水溶液。