[發明專利]一種基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法及其應用

有效

• 申請號: 201910282960.4
• 申請日: 2019-04-10
• 公開（公告）號: CN109975260B
• 公開（公告）日: 2021-12-24
• 發明（設計）人: 于麗;鄭聰;亓魯濱;鹿潔;馬慧;周樂樂
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 楊磊

1.一種基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法，包括步驟如下：

(1)溶菌酶標準溶液的配制：將溶菌酶標準品溶于磷酸鹽緩沖溶液中，制得不同濃度的溶菌酶標準溶液；

(2)標準曲線的測定：分別向步驟(1)制得的不同濃度的溶菌酶標準溶液中加入納米金溶液，于37℃下反應5min，然后加入羅丹明6G溶液，得到混合溶液，分別取混合溶液，經激發光源激發，激發狹縫為2nm，發射狹縫為2nm，掃描其熒光光譜并記錄熒光強度，將每條曲線552nm處的熒光強度與對應的溶菌酶標準溶液濃度的對數值作圖，得到標準曲線；所述的納米金溶液的濃度為0.35nmol/L；所述的納米金溶液的加入體積與溶菌酶標準溶液體積之比為1:1；所述的羅丹明6G溶液的濃度為0.1μmol/L；所述的羅丹明6G溶液的加入體積與溶菌酶標準溶液體積之比為1:1；

所述的納米金溶液按下述方法制備：

將β-環糊精溶液、四氯金酸溶液分別加入到去離子水中，加入堿液調節體系pH值為10.5，然后于60℃下攪拌3h，使四氯金酸充分被還原，得均一穩定的混合溶液，將所得的混合溶液在轉速為9000r/min下離心20min，得到納米金顆粒，所得納米金顆粒分散在三次蒸餾水中，得到納米金溶液；所述的β-環糊精溶液中的β-環糊精和四氯金酸溶液中的四氯金酸的摩爾比為10:1；所述的β-環糊精溶液和四氯金酸溶液的濃度均為0.01mol/L；所述的四氯金酸溶液和去離子水的體積之比為1:38-40；所述的堿性溶液為1mol/L的氫氧化鈉溶液；

(3)待測樣品溶菌酶的測定：將待測樣品溶于磷酸鹽緩沖溶液中，按照步驟(2)的方法測試體系的熒光強度，通過測得的熒光強度對照標準曲線計算得到待測樣品中溶菌酶的含量。

2.根據權利要求1所述的基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的磷酸鹽緩沖溶液包括：磷酸10mmol/L，NaCl 138mmol/L，KCl2.7mmol/L，溶液的pH＝7.4。

3.根據權利要求1所述的基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法，其特征在于，步驟(1)中所述的溶菌酶標準溶液中溶菌酶的濃度為0.1～10μg/mL。

4.根據權利要求1所述的基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的激發光源的激發波長為520nm。

5.權利要求1-4任一項所述的基于納米金熒光檢測溶菌酶的方法，用于尿液中溶菌酶的檢測。