[發(fā)明專利]一種高粱14-3-3蛋白GF14c基因及其重組載體和表達方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910281720.2 | 申請日： | 2019-04-09 |
| 公開（公告）號： | CN109912705A | 公開（公告）日： | 2019-06-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 謝鑫;蔣君梅;任明見;李向陽;孫濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 貴州大學(xué) |
| 主分類號： | C07K14/415 | 分類號： | C07K14/415;C12N15/29;C12N15/70 |
| 代理公司： | 貴陽中新專利商標(biāo)事務(wù)所 52100 | 代理人： | 張行超 |
| 地址： | 550025 貴州省貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 高粱 基因 蛋白 重組載體 蛋白純化系統(tǒng) 基因組數(shù)據(jù)庫 原核表達載體 氨基酸序列 核苷酸序列 生物學(xué)特性 蛋白晶體 蛋白序列 基因編碼 基因構(gòu)建 基因全長 同源基因 抗逆性 蛋白質(zhì) 玉米 研究 | ||
1.一種高粱14-3-3蛋白GF14c基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如權(quán)利要求1所述高粱14-3-3蛋白GF14c基因編碼的蛋白質(zhì)，其氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示。
3.包含權(quán)利要求1所述基因的重組載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述重組載體的制備方法如下：提取高粱RNA，并反轉(zhuǎn)錄出cDNA；以cDNA為模板擴增GF14c基因；將GF14c擴增產(chǎn)物經(jīng)BamHI和XhoI雙酶切后，通過DNA連接酶插入到經(jīng)同樣雙酶切的pET-28a表達載體中，得到重組質(zhì)粒pET-28a-GF14c。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的重組載體，其特征在于，以cDNA為模板，利用以下引物擴增GF14c基因，引物序列如下：
上游引物：GF14c-F：GC
下游引物：GF14c-R：CG
上下游引物分別如SEQ ID NO.3、4所示。
6.一種表達高粱14-3-3蛋白GF14c基因的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)用權(quán)利要求3或4所述的重組載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞，得到表達GF14c的重組原核表達菌株；
(2)將重組原核表達菌株接種到卡那霉素或卡那霉素+氯霉素液體培養(yǎng)基中，過夜培養(yǎng)活化菌株；
(3)將活化的重組原核表達菌株再轉(zhuǎn)接到卡那霉素或卡那霉素+氯霉素液體培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)后加入IPTG誘導(dǎo)重組GF14c的表達；
(4)誘導(dǎo)完成后，回收并純化所表達的GF14c重組蛋白。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表達高粱14-3-3蛋白GF14c基因的方法，其特征在于，步驟(3)中在震蕩培養(yǎng)至OD600＝0.5時，加入終濃度為1.2mM的IPTG，在30℃誘導(dǎo)培養(yǎng)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表達高粱14-3-3蛋白GF14c基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素液體培養(yǎng)基中卡那霉素為50ug/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的表達高粱14-3-3蛋白GF14c基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素+氯霉素液體培養(yǎng)基中卡那霉素為50ug/mL，氯霉素為50ug/mL。
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