[發明專利]一種提高陸地棉愈傷組織誘導率的方法

在審

• 申請號: 201910276125.X
• 申請日: 2019-04-08
• 公開（公告）號: CN109997694A
• 公開（公告）日: 2019-07-12
• 發明（設計）人: 冉毅東;高崑;徐虎;張康
• 申請（專利權）人: 天津吉諾沃生物科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

本發明公開了一種提高陸地棉愈傷組織誘導率的方法。本發明提供了一種獲得棉花胚性愈傷組織的方法，包括如下步驟：1)將棉花外植體在愈傷誘導培養基中誘導培養，得到棉花愈傷組織；2)將所述棉花愈傷組織在愈傷組織分化培養基中繼代培養，得到棉花胚性愈傷組織；所述愈傷誘導培養基包括2,4?二氯苯氧乙酸、N6?異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸和葡萄糖；所述愈傷組織分化培養基包括硝酸鉀和葡萄糖。本發明的實驗證明了與現有技術棉花胚性愈傷誘導時間需要4?6個月相比，本發明可在3個月以內獲取狀態良好的胚性愈傷，為以愈傷組織為基礎的高效擴繁體系及遺傳轉化體系研究提供重要的技術平臺和支持。

技術領域

本發明屬于植物愈傷組織誘導及培養技術領域，具體涉及一種提高陸地棉愈傷組織誘導率的方法。

背景技術

棉花是目前世界上重要的經濟作物之一，是紡織產品的重要原料。隨著人民生活水平的提高和紡織工業的飛速發展，常規育種生產的棉花已不能滿足社會需求，需要進行轉基因遺傳育種來生產高產的棉花新品種。但棉花遺傳轉化技術一直屬于植物基因工程領域的難點，受到多方面因素的限制，其中最主要的限制因素棉花初級愈傷組織與胚性愈傷組織的誘導。如何在提高棉花愈傷組織誘導率是技術瓶頸，因此，急需一種提高棉花愈傷組織誘導率的方法來在短期內高效獲取大量棉花初級愈傷與胚性愈傷。

發明內容

為了解決解決現有技術中棉花愈傷組織誘導時間長、出愈率低的問題，填補了技術空白，本發明提供了如下技術方案：

本發明提供了一種獲得棉花胚性愈傷組織的方法，包括如下步驟：

1)將棉花外植體在愈傷誘導培養基中誘導培養，得到棉花愈傷組織；

2)將所述棉花愈傷組織在愈傷組織分化培養基中繼代培養，得到棉花胚性愈傷組織；

所述愈傷誘導培養基包括2,4-二氯苯氧乙酸、N6-異戊烯腺嘌呤、吲哚乙酸和葡萄糖；

所述愈傷組織分化培養基包括硝酸鉀和葡萄糖。

上述方法中，

所述愈傷誘導培養基包括0.05-0.15mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.05-0.15mg/LN6-異戊烯腺嘌呤、0.05-0.15mg/L吲哚乙酸和20-30g/L葡萄糖；

所述愈傷組織分化培養基包括1.8-2.0g/L硝酸鉀和20-30g/L葡萄糖。

上述方法中，

所述愈傷誘導培養基還包括用于組培的液體基本培養基和凝固劑；

所述愈傷組織分化培養基還包括所述用于組培的液體基本培養基和所述凝固劑；

或，所述愈傷誘導培養基由所述用于組培的液體基本培養基、0.05-0.15mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.05-0.15mg/L N6-異戊烯腺嘌呤、0.05-0.15mg/L吲哚乙酸、20-30g/L葡萄糖和2-2.5g/L所述凝固劑組成；

或，所述愈傷組織分化培養基由所述用于組培的液體基本培養基、1.8-2.0g/L硝酸鉀、20-30g/L葡萄糖和2-2.5g/L所述凝固劑組成。

上述方法中，

所述愈傷誘導培養基由所述用于組培的液體基本培養基、0.1mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.1mg/L N6-異戊烯腺嘌呤、0.1mg/L吲哚乙酸、25g/L葡萄糖和2.2g/L所述凝固劑組成；

或，所述愈傷組織分化培養基由所述用于組培的液體基本培養基、1.9g/L硝酸鉀、25g/L葡萄糖和2.2g/L所述凝固劑組成；

或，所述凝固劑為結冷膠。

用于組培的基本培養基可以為MS或MSB，本發明的實施例中采用的是MSB。