[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于酶催化碘化鉀氧化顯色檢測(cè)過(guò)氧化氫含量的分光光度法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910273956.1
• 申請(qǐng)日: 2019-04-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109975282A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒景;王夢(mèng)云;黃亦欣;王黛瑤;邱詩(shī)藝
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 華僑大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/78
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/78;G01N21/31;G01N31/10
• 代理公司: 廈門(mén)市首創(chuàng)君合專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 35204
• 代理人: 張松亭;姜謐

1.一種基于酶催化碘化鉀氧化顯色檢測(cè)過(guò)氧化氫含量的分光光度法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線及其線性回歸方程：將過(guò)氧化氫酶溶液和碘化鉀溶液加入到緩沖溶液中得第一混合溶液，然后測(cè)定第一混合溶液在特定吸收波長(zhǎng)處的吸光度值，并校零；分別向上述第一混合溶液中加入不同濃度的過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)樣形成第二混合溶液，使過(guò)氧化氫在第二混合溶液中形成0-100μmol L^-1的濃度梯度；將第二混合溶液于4-36℃進(jìn)行氧化顯色反應(yīng)8-45s后，測(cè)定第二混合溶液在上述特定吸收波長(zhǎng)處的吸光度值，記為a；以a作為橫坐標(biāo)，以過(guò)氧化氫在第二混合溶液中的最終濃度作為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線及其線性回歸方程；其中，過(guò)氧化氫酶溶液的活度為400-1600units L^-1，碘化鉀溶液的濃度為20-60mmol L^-1，緩沖溶液的pH值為4.0-7.0，且上述過(guò)氧化氫酶溶液、碘化鉀溶液與緩沖溶液的體積比為0.002-0.06∶0.02-0.44∶1；

(2)測(cè)定待測(cè)樣品中過(guò)氧化氫含量：向上述第一混合溶液中加入待測(cè)樣品形成第三混合溶液，于4-36℃進(jìn)行氧化顯色反應(yīng)8-45s后，測(cè)定顯色后第三混合溶液在上述特定吸收波長(zhǎng)處的吸光度值，記為b；將b代入到步驟(1)中所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程中，再通過(guò)待測(cè)過(guò)氧化氫樣品與第三混合溶液的體積關(guān)系計(jì)算得出待測(cè)的過(guò)氧化氫樣品中過(guò)氧化氫的含量；

上述特定吸收波長(zhǎng)為350nm或400nm。

2.如權(quán)利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述緩沖溶液為醋酸緩沖溶液、磷酸緩沖溶液或硼酸緩沖溶液。

3.如權(quán)利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述濃度梯度為0μmol L^-1、5μmol L^-1、10μmol L^-1、20μmol L^-1、30μmol L^-1、40μmol L^-1、50μmol L^-1、60μmol L^-1及70μmol L^-1。

4.如權(quán)利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述第三混合溶液中，所述待測(cè)樣品與緩沖溶液的體積比為0.04-0.97∶1。

5.如權(quán)利要求1所述的分光光度法，其特征在于：所述步驟(1)中，過(guò)氧化氫酶溶液、碘化鉀溶液與緩沖溶液的體積比為0.002-0.05∶0.02-0.42∶1。

6.如權(quán)利要求1所述分光光度法，其特征在于：所述氧化顯色反應(yīng)的溫度為5-35℃。

7.如權(quán)利要求1所述分光光度法，其特征在于：所用比色皿材質(zhì)為石英，且比色皿長(zhǎng)度為1cm、2cm、3cm、5cm或10cm。