[發(fā)明專利]一種新型的單堿基編輯技術(shù)及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910272959.3
• 申請日: 2019-04-04
• 公開（公告）號(hào): CN111778233A
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊輝;周昌陽
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院腦科學(xué)與智能技術(shù)卓越創(chuàng)新中心
• 主分類號(hào): C12N9/78
• 分類號(hào): C12N9/78;C12N15/55;C12N15/85;C12N5/10
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

1.一種腺嘌呤脫氨酶TadA的突變蛋白，其特征在于，所述的突變蛋白為非天然蛋白，并且所述突變蛋白在腺嘌呤脫氨酶TadA的選自下組的一個(gè)或多個(gè)氨基酸發(fā)生突變：

第147位苯丙氨酸(F)和第148位苯丙氨酸(F)；

其中，所述第147位和第148位是對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO:1所示的序列的第147位和第148位。

2.如權(quán)利要求1所述的突變蛋白，其特征在于，所述突變蛋白具有催化腺嘌呤水解脫氨基生成次黃嘌呤的活性。

3.如權(quán)利要求1所述的突變蛋白，其特征在于，所述的腺嘌呤脫氨酶TadA包括TadA*酶和野生型TadA酶。

4.一種基因編輯酶，其特征在于，所述基因編輯酶的結(jié)構(gòu)如式I所示：

Z1-L1-Z2-L2-Z3-L3-Z4 (I)

其中，

Z1為腺嘌呤脫氨酶TadA的氨基酸序列；

Z2為TadA*酶的氨基酸序列；

并且所述Z1和/或Z2為如權(quán)利要求1所述的突變蛋白的氨基酸序列；

Z3為Cas9核酸酶的編碼序列；

L1、L2和L3各自獨(dú)立地為任選的連接肽序列；

Z4為無或核定位信號(hào)元件(NLS)；

并且各“-”獨(dú)立地為肽鍵。

5.如權(quán)利要求4所述的基因編輯梅，其特征在于，所述基因編輯酶的氨基酸序列如SEQID NO:10所示。

6.一種多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸編碼如權(quán)利要求4所述的基因編輯酶。

7.一種載體，其特征在于，所述的載體含有如權(quán)利要求6所述的多核苷酸。

8.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述的宿主細(xì)胞含有如權(quán)利要求7所述的載體，或其基因組中整合有如權(quán)利要求6所述的多核苷酸。

9.一種基因單堿基定點(diǎn)編輯的方法，其特征在于，包括步驟：

(i)提供一細(xì)胞以及第一載體和第二載體，其中所述第一載體含有如權(quán)利要求2所述的基因編輯酶的表達(dá)盒，并且所述第二載體含有表達(dá)sgRNA的表達(dá)盒；

(ii)用所述的第一載體和第二載體感染所述的細(xì)胞，從而在所述細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行單堿基定點(diǎn)編輯。

10.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

(a1)第一容器，以及位于所述第一容器中的第一載體，所述所述第一載體含有如權(quán)利要求2所述的基因編輯酶的表達(dá)盒。