[發明專利]烏蘇里瓦韋的快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201910267970.0
• 申請日: 2019-04-03
• 公開（公告）號: CN110024690B
• 公開（公告）日: 2022-01-04
• 發明（設計）人: 王麗紅;張春萌;陳尚君;崔紅;趙龍;張義秀
• 申請（專利權）人: 佳木斯大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 李冉

本發明公開了一種烏蘇里瓦韋的快速繁殖方法，通過獲得外植體、外植體消毒、誘導萌發、誘導生根一系列步驟獲得了烏蘇里瓦韋的離體再生植株，實現了烏蘇里瓦韋快速繁殖，具有培育周期短、孢子萌發率高、生根率高、生產成本低的優點，有利于烏蘇里瓦韋的規模化生產。

技術領域

本發明涉及組織培養技術領域，更具體的說是涉及一種烏蘇里瓦韋的快速繁殖方法。

背景技術

烏蘇里瓦韋為蕨類植物真蕨目水龍骨科瓦韋屬植物，具有較強的抗炎鎮痛、抗菌、抗氧化、保肝、止咳等功效。烏蘇里瓦韋主要來源于野生，但野生資源極少，無法滿足人類日益增長的需求，只有解決了快速繁殖的技術難關，才能實現資源的有效保護和可持續利用。但目前人工培育烏蘇里瓦韋的方法未見報道。

蕨類植物常見的繁殖方法有孢子繁殖、分株繁殖和組織培養，孢子在自然環境中的競爭力與耐受力較差，發芽率低，無法廣泛應用；分株繁殖的方式效率低、生產成本高、不利于資源開發利用。目前有將組織培養應用在蕨類植物繁殖方面的探索，但在12000種蕨類植物中，成功進行組織培養的僅占極少一部分，且主要集中在腎蕨、鹿角蕨、鳳尾蕨等少數屬種中。在烏蘇里瓦韋組織培養方法的研究中，存在培育周期長、孢子不易萌發、不易生根等問題，這些難題制約著烏蘇里瓦韋繁殖方法的發展。

綜上，提供一種培育周期短、孢子萌發率高、生根率高、生產成本低的烏蘇里瓦韋繁殖方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種通過組織培養實現烏蘇里瓦韋快速繁殖的方法。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

烏蘇里瓦韋的快速繁殖方法，具體包括如下步驟：

(1)獲得外植體：取帶有孢子囊的烏蘇里瓦韋葉片，在陰涼通風處干燥后保存備用，全過程保持孢子囊完整；

(2)外植體消毒：將步驟(1)中獲得的外植體依次用75％乙醇和HgCl₂溶液消毒；

(3)誘導萌發：在超凈工作臺內，將步驟(2)消毒后的外植體，取其孢子接種于誘導萌發培養基中培養，得到萌發的烏蘇里瓦韋葉片；

(4)誘導生根：在超凈工作臺內，將步驟(3)得到的萌發的烏蘇里瓦韋葉片移種在誘導生根培養基中培養，得到完整再生植株。

普通蕨類植物組織培養，通常有兩種方式，一是以孢子、根、莖、葉為外植體，誘導形成愈傷組織，然后誘導形成完整植株，二是以孢子、根、莖、葉為外植體，誘導形成GGB，之后誘導分化形成完整植株。但烏蘇里瓦韋采取上述兩種組織培養方式只生葉不生根，本發明的技術方案采用通過誘導孢子萌發，誘導生根，形成完整再生植株的方式，解決了這一難題，并且節省了誘導形成GGB或者愈傷組織這一步驟；此外，外植體的選擇對于組織培養十分關鍵，選取葉片、根莖為外植體，組織培養結果均是只生葉不生根，本發明選擇孢子為外植體，成功誘導孢子萌發、生根，完成了烏蘇里瓦韋的快速繁殖。

優選的，所述孢子囊顏色為黃綠色。

近成熟孢子囊顏色呈黃綠色，成熟孢子囊顏色呈深黃色或棕黃色，近成熟孢子囊的分化能力相比成熟孢子囊更強，有利于后續烏蘇里瓦韋的萌發及生根。

優選的，步驟(2)的具體操作方法為：取帶有完整烏蘇里瓦韋孢子囊的孢子葉片，無菌水浸泡20-30h，75％的乙醇消毒20-40s，無菌水沖洗3-5次，之后用體積分數為0.1％的HgCl₂溶液消毒8min，無菌水沖洗3-5次后備用，消毒過程中不打破孢子囊。